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文献和实验
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保存条件 :-80℃冻存
保质期 :二年
英文名 :RBSMC
库存 :20
供应商 :上海泽叶生物科技有限公司
规格 :1x10^6 cells
细胞名称:RBSMC大鼠脑动脉平滑肌细胞细胞英文(简称):RBSMC
细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC
代次:P3
规格:T25
细胞数:1x10^6 cells
组织来源:动脉平滑肌
细胞形态:贴壁
细胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
细胞检测:细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件:RPMI-1640 +10% FBS;37℃,5% CO2
传代方法:建议1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件:完全培养基50%+40%FBS+10%DMSO
传代细胞培养操作步骤
1、 37度水浴加热所有试剂。
2、 吸取培养培养皿内旧培养液,放置一个干净离心管内。(为稍后终止消化作准备。)
3、 用PBS清洗培养皿,弃去。
4、 向瓶内加入消化液(胰蛋白酶液)。以能覆盖培养瓶底为宜。(一般一个大皿1ml)
5、 2-5分钟后,轻轻震荡培养皿。使RBSMC大鼠脑动脉平滑肌细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清(即原培养液)终止消化。
6、 收集细胞悬液,880转/分、5分钟离心,弃去上清液。
7、 加培养液至1ml,混匀后取10ul计数细胞。
8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中,再加入相应体积的培养液。(90mm大皿是9ml,中皿好像是4mm,6孔板和小皿是2ml,96孔板是100ul)。
9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈,使细胞排列均匀。
10、 放入暖箱中继续培养。
细胞计数步骤:
1、将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板上.
2、将细胞悬液吸出少许,用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
3、镜下观察,计算计数板八大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算:
细胞数/ml=8大格细胞总数/ 8×2×10000
细胞冻存与复苏:
RBSMC大鼠脑动脉平滑肌细胞冻存和复苏的原则:慢冻快融
当细胞冷到零度以下,可以产生以下变化:细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升高,并在细胞内形成冰晶。
如果缓慢冷冻,可使细胞逐步脱水,细胞内不致产生大的冰晶;相反,结晶很大,大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重结晶。
1.冻存细胞
(1)选对数增生期细胞,在冻存前1d换液。
(2)按常规方法把培养细胞制备成悬液,计数,使细胞密度达5×106/m1左右密度,离心,去上清。
(3)加入配制好的冻存液(培养液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10%二甲基亚砜(DMSO) 或甘油,它是一种渗透性保护剂,可迅速透入细胞,提高胞膜对水的通透性,降低冰点,延缓冻结过程,能使细胞内水分在冻结前透出细胞外,在胞外形成冰晶,减少胞内冰晶,从而减少冰晶对细胞的损伤
(4)分装于无菌冻存管中,每管加1.5m1悬液。
(5)旋好冻存管并仔细检查,一定要盖紧,作好标记。
(6)冻存:在特殊的仪器或简易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40 min时间内,下降到液氮表面,再停30 min后,直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度,过快能影响细胞内水分透出,太慢则促进冰晶形成。
标准程序:
当温度在-25℃以上时, 1~2℃/min
当温度达-25℃以下时, 5~10℃/min
当温度达-100℃时,可迅速放入液氮中
简易程序:
将冷冻管(管口要朝上)放入纱布袋内,纱布袋系以线绳,通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口,按每分钟温度下降1~2℃的速度,在40分钟内降至液氮表面,停30分钟后,直接投人液氮中。
操作时应戴防护眼镜和手套,以免液氮冻伤。
2. 复苏细胞
(1)从罐中取出冻存管。
(2)迅速放入37℃水浴,不时摇动,使其急速融化,30~60s内完成。
(3)冻存管用70%酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
(4)RBSMC大鼠脑动脉平滑肌细胞低速离心(880r/min) 5 min,去上清后再用培养液洗一次。
(5)用培养液适当稀释后,装入培养瓶37℃培养,次日更换一次培养液后,继续培养。以后仍按常规进行培养。
冻存细胞数量要充分,密度应达到107/m1,在融后稀释20倍后,仍能保持5×105/m1数量。
DSMZ细胞库 | ACC 740 | HD-MB03 | ACC 591 | MOLM-20 | ACC 511 | ALL-SIL | ACC 263 | TE-671 | ACC 606 | KMS-12-PE |
DSMZ细胞库 | ACC 110 | CHO-K1 | ACC 209 | SH-SY5Y | ACC 289 | RV-C2 | ACC 695 | KI-JK | ACC 135 | EM-2 |
DSMZ细胞库 | ACC 743 | GCT-27 | ACC 139 | PLB-985 | ACC 529 | OCI-M1 | ACC 12 | JVM-2 | ACC 458 | BEWO |
DSMZ细胞库 | ACC 539 | DB | ACC 261 | DU-145 | ACC 735 | HT-93 | ACC 574 | SUP-HD1 | ACC 635 | 293T |
DSMZ细胞库 | ACC 113 | MB-L11 | ACC 359 | DBTRG-05MG | ACC 722 | OCI-LY1 | ACC 512 | ARH-77 | ACC 118 | XC |
DSMZ细胞库 | ACC 340 | M3E3/C3 | ACC 643 | SH-2 | ACC 302 | CAL-51 | ACC 654 | GI-ME-N | ACC 641 | ST |
DSMZ细胞库 | ACC 188 | PAB-100 | ACC 260 | RD-ES | ACC 581 | HCT-116 | ACC 14 | KG-1 | ACC 550 | C6 |
DSMZ细胞库 | ACC 184 | D-36 | ACC 213 | A4-840 | ACC 648 | DND-39 | ACC 672 | UPCI-SCC-200 | ACC 747 | SUSA |
DSMZ细胞库 | ACC 148 | NEURO-2A | ACC 277 | DK-MG | ACC 537 | ME-1 | ACC 47 | DOHH-2 | ACC 101 | N4TG3 |
DSMZ细胞库 | ACC 441 | MS-5 | ACC 315 | HT-1080 | ACC 265 | LXF-289 | ACC 387 | KYSE-450 | ACC 281 | 2A1 |
DSMZ细胞库 | ACC 178 | 2E10-H2 | ACC 280 | PAB-1620 | ACC 521 | TALL-1 | ACC 220 | KASUMI-1 | ACC 89 | 72A1 |
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