黄曲霉毒素M1检测试剂盒

保存条件 ：2～8℃

保质期 ：12个月

库存 ：1000

供应商 ：上海研谨生物科技有限公司

规格 ：96孔/盒

黄曲霉毒素 M1 快速检测试剂盒说明书

一、原理

本试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物黄曲霉毒素 M1

将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争黄曲霉毒素 M1 抗体，加入酶标记物后，用 TMB 底物显色，样本吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素 M1 的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物黄曲霉毒素 M1 的含量。

二、试剂盒特性

u试剂盒灵敏度： 0.03ppb

u 孵育温度： 25℃

u 孵育时间： 30min～15min

u样本检测下限

牛 奶 ······································ 0.3 ppb

奶 粉 ······································ 0.12ppb

u交叉反应率

黄曲霉毒素 M1 ···································· 100%

u样本回收率

牛 奶 ·································· 90±25%
奶 粉 ·································· 85±25%
三、试剂盒组成

1 微量测试孔 每条 8 孔，一板 12 条

标准液×6 瓶 0ppb 0.03ppb
2 0.06ppb 0.12ppb
（1ml/瓶）
0.24ppb 0.48ppb


3 酶标记物 7ml 红色帽

4 抗体工作液 7ml 蓝色帽

5 底物 A 液 7ml 白色帽



6 底物 B 液 7ml 黑色帽

7 终止液 7ml 黄色帽

8 20X 浓缩洗涤液 40ml 白色帽

9 2X 浓缩复溶液 50ml 透明帽


四、所用仪器、试剂

具备的仪器：酶标仪、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量 0.01g）、氮吹仪、恒温箱、打印机

微量移液器：单道 20～200µl、单道 100～1000µl、

多道 30～300 µl

试 剂：、乙酸乙酯

五、样本前处理步骤

u样本处理前须知

（a）实验中必须使用一次性吸头，吸取不同试剂时要更换吸头。

（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。

u样本前处理需配制：配液 1 样本复溶液：
用去离子水将 2×浓缩复溶液按 1：1 稀释。

配液 2 样本提取液：

将与乙酸乙酯按 1:2 比例混合均匀（1份+2 份乙酸乙酯）。
u样本处理：

（a）牛奶样本处理方法（适用于乳饮料）：

1、 取牛奶样本 100µl，加入 900µl 去离子水，充分

振荡混匀；2、 取 50µl 用于分析。

样本稀释倍数: 10 倍

（b） 奶粉样本处理方法：

1、 取 1.0±0.05g 奶粉样本于 50ml 离心管中；加入3ml 去离子水，再加入 8ml 样本提取液，充分振荡 3min，20℃ 4000r/min 以上离心 10min；2、 移取 2ml 上层清澈液到另一离心管中，50-60℃


氮气流下干燥；3、 用 1ml 正己烷溶解干燥的残留物，再加入 1ml

样本复溶液充分混合 30s；20℃ 4000r/min 以上离心 10min；去除上层正己烷相；

4、 取 50µl 用于分析。

样本稀释倍数：4 倍

六、 酶标免疫分析程序:

u测定前应须知：

1、 使用前将需用试剂和板条的温度回升至室温（20～25℃）。

2、 使用之后立即将所有试剂放回 2～8℃。

3、 在 ELISA 分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是 ELISA 测定程序中的要点。

4、 所有恒温孵育过程，避免光线照射，用盖板膜盖住微孔板。

u操作步骤：

1、 从 2～8℃冷藏环境中取出所需试剂，室温（20～25℃）平衡 30min 以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2、 取出框架及需要数量的微孔，将不用的微孔放

入自封袋，保存于 2～8℃。

3、 配液：将 40ml 浓缩洗涤液（20 倍浓缩）用去离子水按照 1：19 稀释（1 份浓缩洗涤液+19 份去离子水），或按所需用量配制洗涤液。

4、 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做 2 孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

5、 加标准品/样本 50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物 50µl/孔，再加入 50µl/孔的抗体工作液，用盖板膜盖板，轻轻振荡混匀，25℃环境
反应 30min。

6、 将孔内液体甩干，用稀释后的洗涤液 250µl/孔洗板 4～5 次，每次间隔 15～30 秒，用吸水纸拍干（拍干后未清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

7、 显色：加入底物 A 液 50µl/孔，再加入底物 B 液 50µl/孔，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显
色 15min。

8、 测定：加入终止液 50µl/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于 450nm 处（建议用双波长 450/630n m 检测，5min 内读数），测定每孔 OD 值。

七、结果判定

结果判定有两种方法，粗略判定可用第 1 种方法，定量判定用第 2 种方法。注意样本吸光度值与其所含黄曲霉毒素 M1 量成负相关。
1、粗略判定：

用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ng/ml)。假设样本 1 的吸光度值为 0.3，样本 2 的吸光度值为 1.0，标准液吸光度值分别是：

0ppb 为 2.243；0.03ppb 为 1.816；0.06ppb 为 1.415； 0.12ppb 为 0.74；0.24ppb 为 0.313；0.48ppb 为 0.155。则样本 1 的浓度范围是 0.24ppb～0.48ppb；样本 2

的浓度范围是 0.06ppb～0.12ppb，乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉毒素 M1 实际浓度。

2、定量分析

（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0 标准）的吸光度值，再乘以 100%，即

B
百分吸光率（%）＝ ×100%
B0

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml 标准溶液的平均吸光度值（2）标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光率为纵坐标，以黄曲霉毒素

M1 标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉毒素 M1 实际浓度。

若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）

八、 注意事项

1、 室温低于 25℃或试剂及标本未回到室温（20～

25℃）会导致所有标准的 OD 值偏低。
2、 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

3、 混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。

4、 反应终止液为 2M 硫酸，避免接触皮肤。

5、 不要使用过了有效日期的试剂盒；稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD 值变化；不要交换使用不同批号的盒中试剂。

6、 不用的微孔板放进自封袋重新密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

7、 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。标准品 1 的吸光度值小于 0.5 时，表示试剂可能变质。

8、 该试剂盒最佳反应温度为 25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

九、储藏条件和保质期

1、 储藏条件：试剂盒于 2～8℃保存，不要冷冻。

2、 保 质 期：该产品有效期为 1 年，生产日期见包装盒。

提示：酶标板真空包装袋若有漏气，酶标板仍然正常有效，不影响实验结果，请放心使用。

农业部生物毒素检测重点实验室



联合研制