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文献和实验
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品牌 ：泽叶生物
货号 ：11401ZY60
产地 ：中国/美国/德国
库存 ：大量
供应商 ：上海泽叶生物科技有限公司
规格 ：100T
Luciferase Reporter Gene Assay Kit 萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒产品简介
报告基因检测是现代分子生物学研究领域中分析结构基因旁侧区域潜在的顺式元件（如启动子、增强子和沉默子等）和反式作用因子相互作用关系的一种重要工具。本萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒（Firefly Luciferase Reporter Gene Aassy Kit），是通过萤火虫荧光素（luciferin）为底物来检测萤火虫荧光素酶。荧光素酶在 Mg2+和 O2 参与下催化荧光素氧化成oxyluciferin，在荧光素的氧化过程中，发出生物荧光（bioluminomescence），然后通过化学发光仪或液闪测定仪测定生物荧光。
Luciferase Reporter Gene Assay Kit 萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒产品特点
运输与保存方法
冰袋运输。
未拆封试剂盒-20℃避光保存，有效期为 6 个月。-70℃避光保存，有效期为一年。试剂盒内萤火虫荧光素酶检测试剂（Firefly luciferase assay reagent）避光保存，不能反复冻融。
实验步骤
【注】：裂解产物可室温保存6h，4℃保存16h，-70℃可长期存放。（裂解产物不能多次反复冻融）。
报告基因检测是现代分子生物学研究领域中分析结构基因旁侧区域潜在的顺式元件（如启动子、增强子和沉默子等）和反式作用因子相互作用关系的一种重要工具。本萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒（Firefly Luciferase Reporter Gene Aassy Kit），是通过萤火虫荧光素（luciferin）为底物来检测萤火虫荧光素酶。荧光素酶在 Mg2+和 O2 参与下催化荧光素氧化成oxyluciferin，在荧光素的氧化过程中，发出生物荧光（bioluminomescence），然后通过化学发光仪或液闪测定仪测定生物荧光。
Luciferase Reporter Gene Assay Kit 萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒产品特点
- 简便，快捷。
- 灵敏度高，可检测10-20 mol的荧光素酶。
- 安全，非放射性。
- 酶的浓度线性范围可达8个数量级。
| 编号 | 组分 | 产品编号/规格 | ||
| 11401ZY60（100T） | 11401ZY76（500T） | 11401ZY80（1000T） | ||
| 11401-A | 细胞裂解液 | 60ml | 60ml×5 | 60ml×10 |
| 11401-B | 萤火虫荧光素酶检测试剂 | 10ml | 10ml×5 | 10ml×10 |
冰袋运输。
未拆封试剂盒-20℃避光保存，有效期为 6 个月。-70℃避光保存，有效期为一年。试剂盒内萤火虫荧光素酶检测试剂（Firefly luciferase assay reagent）避光保存，不能反复冻融。
实验步骤
- 细胞裂解：
- 将转入报告基因的细胞中的培养基移除，加PBS轻轻洗涤。按如下方案加入细胞裂解液（Cell lysis buffer），然后将培养板放在微型振荡器上室温振荡15min，充分裂解细胞。
| 细胞培养板 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 |
| 细胞裂解液（µl/孔） | 30µl | 60µl | 120µl | 250µl | 500µl |
【注】：裂解产物可室温保存6h，4℃保存16h，-70℃可长期存放。（裂解产物不能多次反复冻融）。
- 将充分裂解后的裂解产物，10000-15000rpm离心3-5min。离心后将上清液移入新的EP管中进行后续检测。
- 荧光素酶检测：
- 按照仪器说明书要求将荧光测定仪打开，设定参数，测定时间为10s，测定间隔为2s。
- 将样品按照20～100µl的体积（如果样品量足够，请加入100µl）加入测量管中（保持每次样品的加样量一致），另外加入萤火虫荧光素酶检测试剂（Firefly luciferase assay reagent）混匀 2-3 次（不能漩涡混匀），充分混匀后测定RLU（Relative light unit），同时设置细胞裂解液（Cell lysis buffer）为对照孔。
- 温度会对酶的活性会产生影响，因此所有试剂应放置室温后再使用。
- 如用单管荧光测定仪测定，每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致。
- 萤火虫荧光素酶催化的生物发光的最强发光波长为 560nm。
上海泽叶生物科技有限公司
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