ECL发光剂试剂盒

库存 ：1000

供应商 ：乔羽

检测限 ：科研

检测方法 ：实验

应用 ：科研

适应物种 ：参考说明书

标记物 ：电询

样本 ：电询

规格 ：2 x 250 mL

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ECL发光剂试剂盒信息：

一、ECL发光剂试剂盒用途：

本试剂是非放射性发光系统，用于检测固定在膜上的蛋白，其敏感性达1-5pg用X光片可快速地获得永久的硬拷贝结果所含独特的底物足以维持12小时以上的发光，便于反复曝光操作，免疫印迹膜经抗体脱卸处理后可供再次抗体探查使用适用于痕量蛋白或核酸检测特别节省抗体（一抗1:500-1:5000，二抗1:3000-1:10000）

二、ECL发光剂试剂盒原理：

辣根过氧化酶使试剂中的发光物（Luminol）氧化并发光，而试剂中含有增强剂这使得发光增强了1000倍在免疫印迹中，将复杂的蛋白混合物经SDS-PAGE分离，并转移到固相膜上（如NC、PVDF）等，用于免疫学检测，经HRP标记的抗体与膜上的蛋白直接（标记一抗）或间接（标记二抗）反应当加入免疫印迹化学发光试剂后，Luminol发生氧化降解，并发射波长为428nm的光，此光可经X光胶片（放射自显影片）感光记录下来

三、ECL发光剂试剂盒使用方法：

1. 印迹膜制备 按常规方法完成SDS-PAGE和电转膜操作，适当的封闭非常重要可以通过标记一抗或二抗的手段引入HRP，一般采用市售的HRP二抗交联物仔细地淋洗对于降低背景非常重要，在与HRP交联物温育后，膜片更需仔细洗涤，所有步骤均在室温下完成

2. 化学发光试剂的配置 在使用前等量混合A液和B液，混合后尽快使用将膜片置混合液中于室温下振荡温育2分钟，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆盖全膜片

3.蛋白信号显现

1） 用平头镊钳住膜片，垂直置于吸水纸以吸去过量试剂

2） 置膜片于二层保鲜膜之间，小心赶尽气泡

3） 将膜片吸附蛋白面朝上，置于X光片盒中

4） 于暗室中压上X光片

5）根据信号的强弱适当调整曝光时间，一般为1min或5min，也可选择不同时间多次压片，以达最佳效果显影冲洗

6） 调节曝光时间，再次曝光显影

4、膜的重复使用：

配置62.5mM Tris-Hcl,PH6.7,2%SDS, 7ml/100ml的巯基乙醇的溶液，膜放入后，70?C振荡水浴30分钟再用TBST或PBST缓冲液洗脱，最后用BSA（牛血清白蛋白）或牛奶封闭 四、操作注意：

1. 本试剂每个批号均独立优化，请不要混用或稀释本试剂以免降低敏感性；

2. 加入一抗后膜不能再干燥；

3. 适当地封闭和洗涤膜片至关重要；

4. 使用前配置化学发光试剂，配置足够覆盖膜片即可，弃去使用过的混合试剂；

5. 使用干净取样头取用每种试剂；

6. 第一张片子建议曝光1分钟，观察结果后判断最佳曝光时间可从30秒至2小时不等；

7. 除了放射自显影片曝光和洗片处理外，所有步骤均不必在暗室中操作；

8. 膜片可经适当方法洗脱原有抗体，再次印迹使用，在此情况下，此试剂更为理想；

9. 因为它不象生色物质需要从膜片上清除底物

10. NaN3能抑制HRP活性，应避免使用NaN3

五、安全性：无特殊毒性，按普通化学品处理如果不慎与眼、皮肤和衣物接触，请立刻用大量清水冲洗

六、储存：2-8℃密封避光保存一年

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