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保存条件 :室温
保质期 :12个月
英文名 :Universal Plant RNA Extraction Kit
库存 :861
供应商 :北京百奥莱博科技有限公司
规格 :50次
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博供应的北京现货植物通用RNA提取试剂盒打折促销用于生化科研试验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多植物通用RNA提取试剂盒等RNA纯化产品请联系我司咨询订购。
名称:植物通用RNA提取试剂盒
编号:ALH033
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
规格:50次
英文名:Universal Plant RNA Extraction Kit
本试剂盒适用于快速提取植物组织RNA,使用独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,DNase直接在柱上消化残留DNA,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒特点:
1.完全不使用有毒的Beta-巯基乙醇,苯酚,氯*(代"仿")等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.简捷,单个样品操作一般可在40分钟内完成,世界上最简单快速的试剂盒。
3.配套DNase I 柱上消化,得到的RNA不残留DNase消化,可直接用于反转录荧光定量PCR、二代测序、芯片、RACE等实验。
4.世界领先,是同类产品中适应性最广泛的试剂盒,可以提取包括水稻、玉米、小麦、拟南芥、番茄、烟草和一般多糖多酚如棉花、冬青等植物。
5.多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.9~2.2,无DNA残留,可直接用于荧光定量PCR、RT-PCR、芯片、二代测序、Northern-blot等各种实验。
试剂盒组份:
组份 | 50次 |
裂解液RPA | 50ml |
去蛋白液RW1 | 40ml |
漂洗液RW | 10ml |
RNase-freeH2O | 10ml |
DNaseBuffer | 1.25ml×2/td> |
Rnase free DNaseI | 0.25ml |
吸附柱和收集管 | 50套 |
注意事项:
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机。
2. 需要自备乙醇,研钵(可选)。
3. 裂解液RPA和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
提示:第一次使用前请先在漂洗液RW 瓶加入指定量无水乙醇!
1. 直接研磨法(推荐):
a. 新鲜植物组织称重后取100mg 迅速剪成小块放入研钵(冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100mg 放入研钵), 加入1 ml 裂解液RPA 室温下充分研磨成匀浆,注意应该迅速研磨让组织和裂解液RPA 立刻充分接触以抑制RNA酶活性。
b. 将裂解物转入离心管,剧烈摇晃振荡15 秒,13,000rpm 离心5-10 分钟,沉淀不能裂解的碎片。
c. 取480μl 裂解物上清(在不超过RNA 吸附柱能力的情况下可以取更多或者全部上清,这样可以提高产量)转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5 体积),此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。
d. 立刻接操作步骤的步骤3。
2. 液氮研磨法:
a. 取500μl 裂解液RPA,转入1.5ml 离心管中。
b. 液氮中研磨适量植物组织成细粉后,取50mg 细粉转入上述装有RPA 的离心管, 立即用手剧烈振荡20 秒,充分裂解。
c. 用吸头吹打混匀帮助裂解或者剧烈涡旋震荡直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30 秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。
d. 将裂解物13000rpm 离心5-10 分钟,沉淀不能裂解的碎片。
e. 取裂解物上清(在不超过RNA 吸附柱能力的情况下可以取更多的上清,这样可以提高产量)转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5 体积),此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。
f. 立刻接操作步骤的步骤3。
注意:以上液氮研磨法用户可以根据需要加倍处理,可以提高产量。也就是使用1ml 的裂解液RPA和100mg的样品。
3. 将混合物(每次小于720μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱 中,(吸附柱放入收集管中)13000rpm 离心2 分钟,弃掉废液。确保离心后液体全部滤过去,膜上没有残留,如有必要,可以加大离心力和离心时间。
4. 加350μl 去蛋白液RW1,室温放置1 分钟,13,000rpm 离心30 秒,弃掉废液。
5. DNase I 工作液配制:取45μl DNase I buffer 和5μl RNase free DNase I 在离心管轻轻吹打混匀成工作液(处理多个离心柱子要按照比例放大制备工作液)。
6. 向吸附柱 中央加入50μl 的DNase I 工作液,室温(20-30℃)放置15 分钟。
注意:直接将工作液滴在膜中央上,不要让工作液滴在O 型圈或是离心柱管壁上。
7. 向吸附柱 中加入350μl 去蛋白液RW1, 12000rpm 离心30 秒,弃废液,将吸附柱放回收集管中。
8. 加入500μl 漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),13000rpm 离心30秒,弃掉废液。加入500μl 漂洗液RW,重复一遍。
9. 将吸附柱 放回空收集管中,13000rpm 离心2 分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
10. 取出吸附柱,放入一个RNase free 离心管中,根据预期RNA 产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water(事先在70-90℃水浴中加热可提高产量),室温放置1 分钟,12000rpm 离心1 分钟。
11. 如果预期RNA 产量>30μg,加30-50μl RNase free water 重复步骤10,合并两次洗液,或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA 浓度高)。
洗脱两遍的RNA洗脱液RNA浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%,但是浓度要低,用户根据需要选择。
注意:如果不需要做荧光定量PCR,仅仅做普通的反转录,克隆基因片段,可以省略DNA 酶柱上消化的步骤,具体就是第4 步骤的“加350μl 去蛋白液RW1”改成“加700μl 去蛋白液RW1”,同时省略步骤5,6,7。
储存条件:室温,有效期12个月(DNase I及其Buffer需-20℃保存)
本品别名:通用型植物RNA提取试剂盒(Dnase I)|植物通用RNA提取试剂盒|通用植物RNA提取试剂盒|通用植物RNA纯化试剂盒
关键词:通用植物RNA纯化试剂盒,植物通用RNA提取试剂盒,通用型植物RNA提取试剂盒(Dnase I),通用植物RNA提取试剂盒
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