北京现货碱性磷酸酶活性检测试剂盒品牌价格

保存条件：-20℃

保质期：一年

英文名：Alkaline Phosphatase Activity Detection Kit

库存：636

供应商：北京百奥莱博科技有限公司

规格：100T

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销售北京现货碱性磷酸酶活性检测试剂盒品牌，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货碱性磷酸酶活性检测试剂盒品牌
规格：100T
英文名：Alkaline Phosphatase Activity Detection Kit
编号：SY0467
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
本品为碱性磷酸酶活性检测试剂盒，可快速、便捷地检测细胞或组织裂解液/匀浆液、血清、血浆、尿液、纯化酶等样品中的ALP活性。该试剂盒包括标准品和空白对照，可进行达100个样品的检测。

碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，简写为ALP或AKP），又称碱性磷酸酯酶，是一组同工酶，目前已发现六种ALP1-ALP6。广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织，是经肝脏向胆外排出的一种酶。碱性条件下可催化磷酸酯键的水解，从而将底物分子上的磷酸基团去除，转化为羟基。此类底物包括核酸（DNA、RNA）、蛋白、生物碱等。常见的有肠道碱性磷酸酶、非组织特异性碱性磷酸酶、胎盘碱性磷酸酶等；生物学中碱性磷酸酶（ALP）水平的变化及其活性的高低常被作为一种检测组织行为的指标，如：1）作为iPS成功诱导的标志；ALP在大多数细胞类型中均有表达，但是在iPS细胞内的表达水平明显升高；2）结肠癌细胞分化程度定性和定量的指标；3）血清中碱性磷酸酯酶的升高可导致高碱性磷酸酶血症，常被认为和恶性胆管阻塞，原发性硬化胆管炎，肝癌，肝硬化等肝胆疾病密切相关；4）血清中碱性磷酸酶活性升高还和骨骼损伤导致的骨生成，以及骨骼疾病如纤维骨炎、佝偻病、成骨不全等密切相关；5）碱性磷酸酶水平也会出现一些病理性降低的情况，多见于重症慢性肾炎、儿童甲状腺机能不全、贫血等。对于正常成人来说，血清内ALP的范围为40-150U/L。

对硝基苯磷酸（p-nitrophenyl phosphate, pNPP）是一种常用的磷酸酶显色底物，碱性条件下，可在ALP作用下生成对硝基苯酚（p-nitrophenol, pNP），后者在碱性环境下呈黄色产物，并在405nm处可检测到最大吸收峰。产物黄色越深，说明ALP活性越高，反之则活性越低。因此，通过检测OD405吸光值即可计算ALP活性水平。

产品规格：

ALP反应缓冲液 ALP Assay Buffer	15ml	-20℃
显色底物 pNPP Substrate	2管	-20℃避光
pNP标准品溶液p-nitrophenol Standard	100ul (10mM)	-20℃避光
反应终止液 Stop Solution	12ml	-20℃

储存条件：-20℃，有效期一年。

注意事项
1）如果进行酶活力的绝对定量，进行酶反应时必须注意精确计时。此时推荐孵育30min等较长时间，以减小操作过程中的时间误差。如果样品中酶活性较高，则可以预先适当稀释样品。
2）样品溶液中须避免出现EDTA、氟离子、柠檬酸盐等碱性磷酸酶抑制剂。
3）ALP反应缓冲液和p-nitrophenol标准品溶液对人体有害，请注意适当防护。反应终止液有腐蚀性，请小心操作。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 试剂准备
将所有试剂取出，恢复至室温使用。
1）显色底物溶液：取一管显色底物，溶解于2.5ml的ALP反应缓冲液中，充分溶解和混匀，冰上放置。注意：新鲜配制的显色底物溶液需在数小时（≤ 6h）内使用。
2）标准品工作液：取10μl p-nitrophenol标准品溶液(10mM)，用ALP反应缓冲液稀释至0.2ml，使得终浓度为0.5mM。

2．样品准备
1）细胞或组织裂解液的准备：采用适当细胞或组织裂解液裂解细胞和组织，如果有必要需进行适当匀浆，随后离心取上清，用于ALP活性的检测。注意：裂解液中不能含有磷酸酶抑制剂。样品可以-80℃冻存，避免反复冻融。
2）血浆、血清和尿液的准备：血浆和血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。注意：血浆制备不能用含EDTA和柠檬酸盐的抗凝管。尿液通常也可以直接用于测定。上述样品可以-80℃冻存，避免反复冻融。
3）样品的稀释：若样品中含有较高活性的ALP，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，也可以采用试剂盒中的ALP反应缓冲液进行稀释。若使用上述反应缓冲液进行稀释，需保留足够的缓冲液用于试剂盒的检测过程。

3．加样
参考下表使用96孔板设置空白对照孔、标准品孔和样品孔。标准品的用量分别为4、8、16、24、32和 40μl，样品通常可以直接加50μl。如果样品中的碱性磷酸酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

表1 各组分加样数据表

	空白对照（Blank）	标准品（Standard）	样品（Sample）
ALP反应缓冲液	50μl	(100-x)μl	(50-y) μl
显色底物	50μl	－	50μl
样品	－	－	yμl
标准品工作液	－	xμl	－

4. 混匀：用枪头轻轻吹打混匀，也可借助摇床进行混匀。

5. 孵育：37℃孵育5-10min。（待测样品中ALP活性较低时，可适当延长孵育时间至30min）

6. 终止：每孔加入100μl反应终止液终止反应。此时，标准品或有ALP活性的孔会呈现不同深浅的黄色。

7. 检测：405nm测定吸光度。如果不能测定405nm，也可以在400-415nm范围内检测吸光度。如果不能立即测定，可以在数小时内完成测定，所显现的黄色在数小时（≤ 6h）内稳定。

8. 结果分析
碱性磷酸酶活性单位的定义：在pH9.8的二乙醇胺（diethanolamine, DEA）缓冲液中，37℃条件下，每分钟水解pNPP显色底物产生1μm p-nitrophenol所需的ALP量定义为一个酶活力单位，也被称作一个DEA酶活力单位。在pH9.6的甘氨酸缓冲液中，25℃条件下，每分钟水解pNPP显色底物产生1μm p-nitrophenol所需的ALP量定义为一个酶活力单位，也被称作一个甘氨酸酶活力单位。一个甘氨酸酶活力单位约相当于3个DEA酶活力单位。本试剂盒测定的是DEA酶活力单位。

最后，根据酶活性单位的定义，计算出样品中的碱性磷酸酶活性。

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·小牛肠碱性磷酸酶
编号：SY0388
英文名称：Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP)
规格：1000U
本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。Alkaline Phosphatase，中文名碱性磷酸酶，可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’ 端无磷酸基团，因而不可以和自身3’ 端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板，以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。

来源：携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母
质量控制（Quality Control）：无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染
热灭活（Thermal Inactivation）：在螯合剂存在下，65℃加热30min，99%活性不可逆丧失；使用苯酚，可使酶完全失活。
储存液条件（Storage conditions）：10 mM Tris-HCl (pH8.0), 1 mM MgCl2, 50mM KCl, 0.1 mM ZnCl2, 50% glycerol.
活性定义：在pH9.8, 37℃条件下，以对硝基苯酚磷酸盐(p-nitrophenylphosphate)为底物，1分钟生成1µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。
最佳pH（Optimal pH）：该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10，在底物浓度低时，最佳pH为8，此时该酶活性较高浓度底物时稍低。
优化体系（Optimal Buffer）：AP Buffer (500 mM Tris-HCl, pH9.0; 10 mM MgCl2)
储存条件：-20℃

使用方法:
1 DNA去磷酸化
① 在1.5ml离心管中加入下列试剂：
无菌ddH2O————Up to 50µl
DNA 片段*————1-20pmol
Alkaline Phosphatase————1-2µl
10×AP buffer————5µl
【*】：单链DNA或含5’端突出末端的DNA推荐低温下孵育，平末端DNA或含3’突出末端的DNA建议在较高温度下孵育。
② 混匀上述试剂，于37℃或50℃孵育30min。或者37℃孵育15min后，再于50℃孵育15min。

2 酚氯*(代"仿")法抽提DNA
① 苯酚/氯*(代"仿")/异戊醇（25:24:1）抽提2次。
【注】：推荐在酚提取前将其在含5 mM EDTA, 0.5% SDS ,50 μg/ml Proteinase K的溶液中56℃孵育30min以彻底灭活碱性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10min，灭活效果更佳。
② 氯*(代"仿")/异戊醇（24:1）抽提。

3 乙醇沉淀DNA
① 加入2.5µl 3M NaCl(终浓度150mM).
② 加入125µl（2.5倍体积）预冷乙醇，混匀后于-20℃放置30-60min，沉淀DNA。

4 溶解DNA
离心，彻底去除乙醇后，将DNA溶于适量去离子水（＜20µl）。