透射电镜技术服务价格_品牌:-丁香通官网

服务名称：透射电镜技术服务

提供商：武汉华联科生物技术有限公司

实验原理
透射电子显微镜（transmission electron microscope，TEM）是利用阴极发射的电子，通过阳极中央的微孔形成的电子束穿透样品获得样品的电子信号，经物镜、中间镜和投影镜等多级电子放大至数百至数千万倍，最后成像在荧光屏上便可即时观察，或是投射到照相底片感光片上作为永久记录。目前TEM的分辨力可达0.2 nm。
由于标本必须置于高真空中进行电镜观察，所以电镜观察的生物标本必须特殊制备，不能含水，离体的生物标本要迅速加以固定，以防产生结构改变。另外，电子的穿透力很弱，这就需要把样品制成50 nm～100 nm厚的超薄切片（一个细胞切成100～200片）。为了使柔软的生物组织能够制成这样薄的切片，并使切片耐受高真空和电子轰击，所以在切片前要进行包埋。超薄切片技术是透射电镜观察成功的关键。

实验应用
透射电镜主要应用于生物和材料两大领域的观察研究。

操作步骤
（1）取材
取材部位要准确；大小要适宜，一般≤1 cm3；取样要快，严防对样品的挤压损伤，以使样品更接近于活体状态；样品的基底部应切割平整，以便于样品黏贴，观察面应作好识别标记。
（2）清洗
常规用生理盐水或PBS液清洗样品表面，使样品观察面的表面特征充分暴露出来。特殊样品（如胃、肠粘膜、及乳腺组织等）需用特殊清洗液清洗。
（3）固定
常用的固定液有1－4%戊二醛和1－2%锇酸，一般先用戊二醛固定1至几小时或更长时间，经缓冲液充分清洗后，再用锇酸固定30－60分钟。固定的目的是为了保留样品的微细结构和外部形貌，使其更接近于生活状态；使组织硬化，以增强样品在随后的干燥过程中耐受表面张力变化的能力。
（4）脱水
用低表面张力且易挥发的有机溶剂（乙醇、丙酮等）取代组织细胞中的游离水，使样品在后续的干燥过程中表面张力减少。50% 丙酮溶液1次，10分钟；70% 丙酮溶液1次，10分钟；90% 丙酮溶液2次，每次10分钟；100% 丙酮溶液3次，每次10分钟。
（5）浸透
吸弃脱水剂，加3 mL纯丙酮－EPON812包埋剂（1:1体积比），室温下放置30分钟后，弃去稀释的包埋剂，加纯包埋剂1 mL，室温放置2小时或过夜。
（6）包埋
吸取混合包埋剂滴几滴与样品上，需覆盖整个样本，在60℃固化24小时。
（7）修块
将包埋块安装在特制的夹具上，在显微镜下用单刃刀片修整去除表面的包埋剂，并做记号以便定位。
（8）切片
先将包埋块固定在超薄切片机上，切厚约1 μm的半薄切片，用甲苯胺蓝染色法染色。镜下观察细胞图像，确定进行超薄切片的部位，并作标记。
（9）干燥
准备φ3mm，150～200目的铜网，用清洗液清洗，并用无水乙醇脱水。
（10）贴片
制备好支持膜，小心放在铜网上。在超薄切片机上安装三角形玻璃刀，固定包埋块，切取50～70 nm厚度的超薄切片，用睫毛笔挑选切片并用钢丝环套取切片，贴在铜网有支持膜的一侧，保存在干燥器皿中待染色。
（11）电子染色
用一干净培养皿，内放干净的牙科石蜡片。在石蜡片上加1至数滴醋酸钠染色液，用镊子夹住载网边缘，把贴有切片的一面朝下，使载网浮在液滴上，盖上培养皿染色5～30分钟，染色后尽快用双蒸水清洗三次。用滤纸吸去载网多余的水分，置培养皿内自然干燥。再将载网放在另一只备有蜡片的培养皿中以同样方法进行柠檬酸铅的染色及清洗。片染后凉干待观察。
（12）电镜观察
按照实验目的调整好拍照倍数，在透射电镜下观察样品表面形态结构