石蜡包埋

服务名称 ：石蜡包埋

提供商 ：华联科

实验原理
石蜡制片法是将材料经固定、脱水、透明、浸蜡后包埋在石蜡里面进行切片的方法。此法适用范围广，制片手段完备，能将材料切成极薄的片子（可切至2－8微米左右），并能制成连续的片子，这是其它制片法难以达到的，因此在光学显微镜的制片技术上它是最常用的一种方法。除了一些经不住石蜡切片法中所应用的各种药剂处理的材料不能应用石蜡切片以外，一般的材料都可以用此法制片。

操作方法
（1）样本的采集与分割
采集样本应根据制片的目的和要求而定，材料要有代表性，无病虫害或其它损伤，如要观察病理解剖，则要取病斑、病症部位。尽量活杀，最好在1 h内完成取材。为使固定液能迅速的渗透材料，材料要进行分割。分割时动作要迅速，以防材料萎蔫。分割块的大小，宜小不宜大，一般不超过1 cm3，分割后立即杀死固定。
（2）固定
将处理好的样本固定在4%多聚甲醛溶液中，固定时间依照样本来源、样本大小和致密程度而定，一般室温固定几小时或4℃过夜。（4℃冰箱可放置1－3个月）
（3）脱水
脱水的目的是除去组织中的水分，便于透明、浸蜡、包埋等步骤的进行，因为这些程序中所用的试剂都不能与水混合，所以必须脱水。常用的脱水剂为酒精。脱水过程应缓慢进行，不能操之过急或时间过长，以免组织变硬变脆或发生收缩现象。脱水采用等级脱水，即从较低浓度酒精开始，逐渐替换到高浓度酒精。一般为：70%→80%→90%→95%→无水酒精（两次），脱水时间应视组织种类，组织块大小，厚薄和固定剂的不同而异。
（4）透明
透明的目的是将脱水剂从材料中除去，使材料透明，增加折光系数；同时便于下步的浸蜡和包埋等程序。透明剂是一种既能与脱水剂混合，又能与包埋剂混合的药剂。常用的透明剂为二甲苯，苯，甲苯，氯。仿，香柏油等，适用原则也是逐级进行，可减少材料收缩。一般步骤是：2/3纯酒精+1/3二甲苯→1/2纯酒精+1/2二甲苯→1/3纯酒精+2/3二甲苯→二甲苯（两次）。二甲苯穿透能力强，但又宜使材料收缩变脆，使用时不能在其中停留时间过长。若材料放入二甲苯中时有白色混浊现象发生，说明材料脱水不彻底，应把材料退回至纯酒精中再行脱水。
（5）浸蜡
蜡的目的是逐渐除去透明剂，并为包埋剂所代替。常用的包埋剂是石蜡。浸蜡过程是使石蜡慢慢溶于浸有材料的透明剂中，溶解在透明剂中的石蜡渐渐深入到材料的细胞中去，最后使透明剂完全被石蜡取代，以便切片。
用作浸蜡的石蜡不应含有尘粒，杂质及其他异物，不含水分，质地均匀成半透明状，触之感觉滑而不腻，结晶及颗粒少。石蜡中如有水分会结晶而变为白斑可用加热搅拌的方法除去。所有的蜡在使用前按常规必须用标准滤纸在漏斗内过滤到搪瓷杯里储存于浸蜡箱中。所用的石蜡有一定的熔点和硬度，熔点高，硬度大。一般要求在52－56℃之间，这既可以支持硬组织也可使切片成条。使用时应根据组织类型以及制片时的温度和气候而异。夏季采用高熔点的石蜡，冬季则采用低熔点的石蜡。浸蜡时间大约1~2天。
石蜡的熔点越低，其质地相应的较为疏松。硬蜡（熔点60℃）用于硬纤维组织。软蜡用于胎儿和乳腺组织，这些尽为研究工作的需要。为了增加石蜡的韧性，可在石蜡中加入一些混合剂，常用蜂蜡，硬脂酸，松香等。
（6）包埋
材料浸蜡后再换两次已熔融的纯蜡，然后将材料和石蜡一起倒入提前叠好的包埋纸盒中，用加热的镊子迅速将材料按一定的间隔和所需的切面摆放整齐，同时用加热的镊子赶走材料周围的气泡，待纸盒表面的石蜡凝固后将纸盒平放入冷水中，使石蜡迅速凝固。最后从纸盒中取出蜡块，以便保存。注意将样品编号封于蜡块上，以免样品混淆。

实验周期与费用
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