北京多聚L-赖氨酸(分子量15万~30万)价格

北京多聚L-赖氨酸(分子量15万~30万)价格

价格: ¥180 - 3860

品牌:百奥莱博

货号:SY0461

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保存条件 :-20℃干燥

保质期 :4年

英文名 :Poly-L-lysine, Mw 150,000-300,000

库存 :598

供应商 :北京百奥莱博科技有限公司

CAS号 :25988-63-0

规格 :25mg

特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京多聚L-赖氨酸(分子量15万~30万)价格是高品质的蛋白质研究,由北京百奥莱博供应,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多多聚L-赖氨酸(分子量15万~30万)等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。


名称:北京多聚L-赖氨酸(分子量15万~30万)价格
英文名:Poly-L-lysine, Mw 150,000-300,000
CAS:25988-63-0
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
本品为多聚-L-赖氨酸(Poly-L-lysine),分子量为150,000-300,000,适用于细胞培养。另外,以氢溴酸(HBr)的形式提供,约1个赖氨酸残基结合1分子的氢溴酸,使其以稳定的结晶固体形式提供,并具有更强的水溶性。用作细胞培养基质,推荐使用量为:对于25cm2的培养板需要0.1mg/ml的聚赖氨酸溶液约0.5ml-1.0ml。

多聚赖氨酸(poly-lysine)是一种带正电荷的氨基酸聚合物,能够结合于DNA,红细胞膜或任何带负电荷蛋白,是一种非特异性的细胞粘附因子,促进细胞吸附到固相基质上。作用机理在于其可增强细胞膜表面的负电荷离子和固相基质表面(如细胞培养皿,载玻片等)的静电相互作用。当吸附到培养表面后,多聚赖氨酸提高用于细胞结合的阳离子结合位点数。多聚赖氨酸分子量的大小与粘度相关,即分子量较低,粘度较低;分子量较高,粘度较高,提供的粘附位点也较多。分子量>30,000的聚赖氨酸适用于促进细胞粘附到固体基质。

多聚赖氨酸(poly-lysine)有两种常见亚型,D-和L-型。由于多聚赖氨酸是细胞结合的非特异性粘附因子,因此两种亚型都可用作包被固体基质,在细胞培养中都可促进细胞的贴壁生长。

中文别名:多聚赖氨酸溶液(L型)
英文别名:Poly-L-lysine Solution; PLL; Poly-L-lysine hydrobromide Solution
CAS:25988-63-0
分子式:L-Lys-(L-Lys)n-L-Lys·xHBr
分子量:150,000-300,000
外观:白色至类白色粉末
溶解性:溶于水(50mg/ml)
储存条件:-20℃干燥,有效期4年
结构式


注意事项
1)注意在细胞培养相关应用中,某些细胞会消化多聚 L-赖氨酸并吸收,摄入过多的多聚 L-赖氨酸会产生一定的细胞毒性。因此,遇到这种情况需选用多聚 D-赖氨酸(Poly-D-lysine),如多聚D-赖氨酸(5 mg/ml),分子量:150,000-300,000,细胞培养级,货号:SY0464。
2)将若想去除本品中的HBr,可将本品溶于中性缓冲液,可透析除去盐离子。
3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

北京多聚L-赖氨酸(分子量15万~30万)价格极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:

·小鼠抗β-Tubulin单克隆抗体
编号:SY0638
英文名称:β-Tubulin, Mouse mAb
规格:40μl(>20次)
本品为小鼠抗β-Tubulin单克隆抗体,小鼠抗β-微管蛋白单克隆抗体。推荐稀释比例:WB(1:10000~20000)。

微管蛋白是一类含有多个成员的蛋白质家族。其最常见的成员是α-微管蛋白和β-微管蛋白,它们是组成微管的主要成分,这两种微管蛋白具有相似的三维结构,能够紧密地结合成二聚体,作为微管组装的亚基。β亚基是由455个氨基酸组成,分子量约为55kDa。本品常作为一种内部参照用于相关免疫学实验。

产品类型:Mouse IgG1 Monoclonal
反应性:人、小鼠、衣藻、果蝇、扁虫、袋鼠、非洲爪蟾蜍
抗原分子量:55kDa
应用:IF, WB, IHC, IP
免疫原:Tubulin, beta (Tubb/TUBB)
储存条件:-20℃,避免反复冻融。

·p53-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号:SY0098
英文名称:p53 luciferase reporter plasmid
规格:1μg
p53荧光素酶报告基因(报告基因质粒)(p53 luciferase reporter plasimd)是用于检测p53转录活性水平为目的的报告基因。p53是一个重要的抗癌基因使癌细胞自杀,防止癌变;还具有帮助细胞基因修复缺陷的功能。

p53报告基因主要应用于以p53为靶点的新型抗肿瘤化合物的筛选以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMp53-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体,在其多克隆位点插入了多个p53结合位点,可以高灵敏度地检测p53的激活水平。同时,对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变,增加了质粒的转录因子结合特异性。另外,由于质粒体积减小,使得p53报告基因质粒更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
pGMp53-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

储存条件:-20℃。


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·His标签蛋白琼脂糖纯化树脂
编号:SY0392
英文名称:Ni-NTA Agarose Resin
规格:10ml
Ni-NTA Agarose Resin以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质,通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸(NTA)为配体,螯合镍离子(Ni2+)后,形成非常稳定的八面体结构,镍离子处于八面体的中心,这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻,与Ni-IDA树脂相比,更加稳定,可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。已经成为实验室纯化His标签蛋白不可获取的树脂之一。

基质(Matrix):高度交联的4%琼脂糖凝胶
孔径(Bead size):45-165µm
载量(Capacity):>40mg 6×His-tagged protein/ml 基质
耐压(Tolerance Pressuremax):0.1MPa, 1bar
储存缓冲液:含20%乙醇的1×PBS
储存条件:4℃,有效期2年。


使用方法

(一)纯化流程

1 缓冲液的准备
缓冲液使用原理:低咪唑上样,高咪唑洗脱,或者高pH上样,低pH洗脱。Buffer 在使用前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤除菌。可溶性组氨酸标签蛋白纯化所需配方详见附表1。包涵体组氨酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表2。

2 样品准备
2.1 细菌表达的蛋白(本说明以细菌表达的蛋白纯化为例)
1)挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中,根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。
2)表达结束后,将培养液转至离心瓶,7000rpm,离心15min,收集菌体,然后加入1/10体积的裂解液(Lysis buffer)和PMSF(PMSF在破碎前加入,其终浓度为1mM),同时也可加入其他蛋白酶抑制剂,但不能影响目的蛋白与树脂的结合。
3)之后加入溶菌酶,使其工作浓度为1mg/ml。【注】:如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE,可以不加入溶菌酶。
4)将菌体沉淀悬浮起来(如果菌液浓度高,可考虑加入10µg/ml RNase A和5µg/ml DNase I),混匀,置于冰上超声破碎细胞,至菌液基本保持澄清。
5)收集上述澄清蛋白液,10000rpm,4℃离心20-30min。取上清0.22µm或0.45µm滤膜过滤后置于冰上备用或-20℃保存。
2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白
将细胞培养液转移至离心瓶,5000rpm离心10min,收集上清。如上清中不含EDTA、组氨酸和还原剂等,即可直接上柱纯化;如含有EDTA、组氨酸和还原剂等物质,则需用1×PBS 4℃下透析后方可上柱。
【注】:对于大量体积的上清,需加入硫酸铵进行沉淀浓缩,之后经1×PBS 4℃下透析后上柱。
2.3 包涵体蛋白纯化(以细菌为例)
1)将培养液转移至离心瓶,7000rpm,离心15min,收集菌体去上清。
2)按照菌体:裂解液=1:10(w/v)的比例将菌体充分悬浮,混匀,冰浴超声破碎。
3)将破碎液转移至离心管,10000rpm,4℃离心20-30min,去上清。可重复步骤2)和3)一次。
4)按照菌体:裂解液(含8M尿素)=1:10(w/v)的比例将包涵体充分悬浮。
5)变性条件下纯化His标签蛋白纯化。

3样品纯化

1)装柱:将Ni-NTA Agarose Resin借助重力的作用装入合适的纯化柱中。
2)清洗:3-5倍柱体积去离子水冲洗色谱柱。
3)平衡:至少5倍柱体积的Lysis Buffer 平衡色谱柱。
4)上样:注意控制加样速度,确保目的蛋白与Ni2+充分接触,以提高纯化得率。
【注】:注意收集流出液,用于后续SDS-PAGE检测蛋白的结合情况。
5)平衡/洗杂:Wash Buffer 平衡柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10-15个柱体积)。注意收集流出液。
【注】:在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。
6)洗脱:使用5-10倍柱体积Elution Buffer洗脱,收集洗脱液即目的蛋白溶液。
7)清洗:依次用3倍柱体积的Lysis Buffer和5倍柱体积的去离子水清洗树脂。
【注】:建议在清洗之前用更高浓度咪唑(如500mM)彻底清洗纯化柱上结合的杂蛋白。
8)保存:5倍柱体积的20%乙醇平衡树脂,最后将树脂保存在20%乙醇的1×PBS中,置于4℃保存。

4 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

(二)在位清洗
当填料使用过程中发现反压过高(>0.5Mpa)或者填料上面出现明显的污染时,需对其进行在位清洗(Cleaning-in-Place,CIP)。在位清洗时,先把Ni2+脱掉,清洗结束后,将填料保存在20%乙醇中,后者重新挂Ni后再保存在20%乙醇中。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物,如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。

1 去除强疏水结合的蛋白,脂蛋白和脂类
使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积,接触时间为15-20min可以去除此类污染物。之后再用去离子水清洗10倍柱体积。也可以选择使用含有去污剂的酸性或者碱性溶液清洗填料2倍柱体积。例如含有0.1-0.5%非离子去污剂的0.1M醋酸溶液,接触时间为1-2h。去污剂处理后,需用70%的乙醇清洗5倍柱体积,彻底去除去污剂。最后利用去离子水清洗10倍柱体积。

2 去除离子作用结合的蛋白
使用1.5M NaCl 溶液接触10-15min,之后用去离子水清洗10倍柱体积。

(三)填料再生

当填料使用过程中发现反压过高,填料上面出现明显的污染,或填料载量明显变低时,需要对其进行镍离子剥离及重新挂镍处理,即填料再生。按照下面操作流程进行:

1)使用0.2M 醋酸溶液(含6M GuHCl)清洗2倍柱体积;
2)去离子水清洗5倍柱体积;
3)2%SDS清洗3倍柱体积;
4)去离子水清洗5倍柱体积;
5)乙醇清洗5倍柱体积;
6)去离子水清洗5倍柱体积;
7)100mM EDTA(pH 8.0)清洗5倍柱体积;
8)去离子水清洗5倍柱体积;
9)100mM NiSO4清洗5倍柱体积;
10)去离子水清洗10倍柱体积。

填料再生后,可立即使用,也可保存在20%乙醇中,置于4℃备用。


附表1 可溶性His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方

缓冲液名称 配方 配制1L溶液所需各种试剂量
Lysis Buffer (pH8.0) 50mM NaH2PO4
300mM NaCl
10 mM imidazole
NaOH调pH至8.0, 0.22µm或0.45µm过滤除菌
NaH2PO4 ·2H2O 7.8g
NaCl 17.54g
Imidazole 0.68g
Wash Buffer (pH8.0) 50mM NaH2PO4
300mM NaCl
20 mM imidazole
NaOH调pH至8.0, 0.22µm或0.45µm过滤除菌
NaH2PO4 ·2H2O 7.8g
NaCl 17.54g
Imidazole 1.36g
Elution Buffer(pH8.0) 50mM NaH2PO4
300mM NaCl
250 mM imidazole
NaOH调pH至8.0, 0.22µm或0.45µm过滤除菌
NaH2PO4 ·2H2O 7.8g
NaCl 17.54g
Imidazole 17.0g


附表2 包涵体His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方
缓冲液名称 配方 配制1L溶液所需各种试剂量
Lysis Buffer (pH8.0) 8M Urea
100mM NaH2PO4
100 mM Tris·HCl
盐酸溶液调pH至8.0, 0.22µm或0.45µm过滤除菌
Urea 480.5g
NaH2PO4 ·2H2O 15.6g
Tris 15.76g
Wash Buffer (pH6.3) 8M Urea
100mM NaH2PO4
100 mM Tris·HCl
盐酸溶液调pH至6.3, 0.22µm或0.45µm过滤除菌
Urea 480.5g
NaH2PO4 ·2H2O 15.6g
Tris 15.76g
Elution Buffer(pH4.50) 8M Urea
100mM NaH2PO4
100 mM Tris·HCl
盐酸溶液调pH至4.5, 0.22µm或0.45µm过滤除菌
Urea 480.5g
NaH2PO4 ·2H2O 15.6g
Tris 15.76g


附表3 Ni-NTA Agarose Resin试剂耐受情况
试剂种类 浓度
还原剂 5mM DTE
0.5-1 mM DTT
20mM β-mercaptoethanol
5mM TCEP
10mM reduced glutathione
变性剂 8M urea
6M Gua-HCl
去污剂 2% TritonTM X-100(nonionic)
2% TweenTM20(nonionic)
2% NP-40(nonionic)
2% Cholate (anionic)
1% CHAPS (zwitterionic)
其他类 500mM imidazole
20% ethanol
50% glycerol
100mM Na2SO4
1.5M NaCl
1mM EDTA
60mM citrate
缓冲液 50mM sodium phosphate, pH7.4
100mM Tris-HCl, pH7.4
100mM Tris-acetate, pH7.4
100mM HEPES, pH7.4
100mM MOPS, pH7.4
100mM sodium acetate, pH7.4



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