细胞免疫荧光检测

细胞免疫荧光是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光（黄绿色或桔红色），可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。

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技术流程

1. 细胞爬片：将细胞按20%-30%的汇合度接种到24孔细胞培养板中的圆形盖玻片上。
2. 细胞固定：4%冷的paraformaldehyde固定20分钟，PBS洗三遍。
3. 细胞通透：Triton X-100 通透20分钟，PBS洗三遍。
4. 封闭：用与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，PBS洗三遍。
5. 一抗孵育：一抗4度湿盒内过夜，也可37度2小时，PBS洗三遍。
6. 二抗孵育：二抗室温孵育2小时或者37度1.5小时（避光），PBS洗三遍。
7. DAPI染核：在二抗孵育1小时后加入终浓度为100ng/ml的DAPI继续孵育。然后可在荧光显微镜下观察或直接封片保存。
8. 甘油封片：在载玻片上滴一小滴甘油，小心地将细胞爬片从细胞培养板中取出来，种植有细胞的一面朝下轻轻的盖在甘油上，避免产生过气泡。4度孵育过夜晾干。
http://www.abace-biology.com/immune-fluorescence-detection.htm
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