miRNA荧光定量PCR检测试剂盒 核酸扩增(PCR)

保存条件 ：-20℃

保质期 ：6个月

英文名 ：miRNA fluorescent quantitative PCR detection kit

库存 ：720

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

规格 ：50μl×50次

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

miRNA荧光定量PCR检测试剂盒 核酸扩增(PCR)是高品质的核酸扩增(PCR)，由北京百奥莱博供应，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多miRNA荧光定量PCR检测试剂盒等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。

名称：miRNA荧光定量PCR检测试剂盒 核酸扩增(PCR)
品牌：百奥莱博
规格：50μl×50次
英文名：miRNA fluorescent quantitative PCR detection kit
编号：ALH190
本试剂盒采用SYBR Green I 嵌合荧光法的原理进行miRNA 荧光定量检测。本试剂盒包含miRNA 荧光定量检测的所有试剂，包括2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer。2×miRNA qPCR Mix（含Sybr Green）是专门为miRNA 定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR 检测试剂，其中的DNA polymerase 采用的是抗体修饰的热启动形式， 配合特殊的Buffer 体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内进行准确定量。（该试剂盒须与miRNA对应cDNA第一链合成试剂盒（ALH189）配套使用。）

试剂盒组分(25次)：
2 x miRNA qPCR Mix(With Sybr Green)———————1.25 ml
Reverse primer(10μM)——————————————55μl

需自备的试剂：
1. 分子生物学实验级别的水（无核酸酶）
2. 待检测miRNA对应的qPCR上游引物（Forward primer）

Forward Primer设计原则：
1. 遵循引物设计的最普遍原则。
2. 以成熟的miRNA 序列为基础，将U替换成T，这是最基础和最简单的设计方法。
3. 试剂盒中提供的下游引物的Tm 值为65℃，设计上游引物的Tm 值要尽量保证在65℃左右。
4. 若按照原则2 的方式直接设计的引物其Tm 值过低，可以在引物的5’端添加几个碱基（最好为G或C碱基）；也可以在’3端添加1 个或几个A 碱基；或者5’端和3’端同时修饰。
5. 若按照原则2 的方式直接设计的引物其Tm 值过高，可以在引物的5’或3’端去掉几个碱基。

注意事项：
1. miRNA 第一链cDNA 的加入量不要超过real time PCR 体积1/10。
2. 对于特殊的检测体系中，高含量的cDNA 模板易导致非特异性扩增，根据所检测miRNA 的丰度适当的稀释cDNA（10倍或者100倍）。
3. 本品中含有荧光染料Sybr Green，I保存本品或配制PCR 反应液时应避免强光照射。
4. 2×miRNA qPCR Mix不含参比染料ROX，客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX参比染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。

储存条件：-20℃，有效期6个月。

本品别名：miRNA荧光定量PCR检测试剂盒|microRNA荧光定量PCR试剂盒|microRNA荧光qPCR试剂盒|miRNA荧光定量检测试剂盒

miRNA荧光定量PCR检测试剂盒 核酸扩增(PCR)正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·DNA加A尾试剂盒
编号：ALH352
英文名称：Flat end DNA add A tail Kit
规格：50次
本试剂盒提供了加A尾需要的所有成分，可以在20分钟左右完成整个过程。由Pfu、Pwo、Vent或KOD等有3’→5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶扩增的PCR产物为不带A尾的平末端DNA*(代"片")段，如该平末端DNA*(代"片")段需要和T载体相连接，需要先利用Taq DNA polymerase在平末端片段后加上A尾后才能与T载体的T头互补连接。

试剂盒组分：
Taq DNA polymerase——————————50μl
10×A-tailing buffer—————————50μl
dATP Mix———————————————50μl

操作步骤：
1. 平末端PCR 产物用PCR 清洁（无非特异扩增）或者胶回收纯化（有非特异扩增）。
2. 纯化好的平末端DNA 片段按以下反应体系加A尾:
平末端DNA 片段—————————7μl（不超过1μg）
dATP Mix————————————1μl
10×A-tailing buffer——————1μl
Taq DNA polymerase———————1μl
3. 轻轻混匀后72℃保温20-30 分钟。
4. 加A 尾的产物可以不需要再次清洁或者胶回收纯化，可直接用于连接反应。

储存条件：-20℃。

·M-MuLV反转录酶(不含RNase H活性)
编号：ALH257
英文名称：M-MuLV Reverse Transcriptase
规格：10KU|10KU×5
本品是使用通过基因重组技术克隆表达的点突变型RNase H活性缺失的M-MuLV反转录酶。野生型的M-MuLV包含的RNase H活性能够催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA，因此在cDNA第一条链的合成反应中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，与M-MuLV 相比，具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。本酶浓度200 units/μl，合成cDNA*(代"片")段长度最高可达12kb。

试剂盒组分(10KU)：
M-MuLV RTase(200U/μl)———————10000U
5×RT Buffer————————————500μl

注意事项：
1. 避免RNase污染。
2. 为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3. 如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构，可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混匀，65℃变性5分钟，冰上冷却，短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。

储存条件：-20℃。


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·血浆miRNA提取试剂盒
编号：ALH067
英文名称：Plasma microRNA Extraction Kit
规格：50次
本试剂盒采用独特的裂解液迅速直接裂解血清血浆RNA酶，强烈有机抽提去除蛋白和DNA，RNA包括微小分子RNA在高浓度乙醇下吸附于离心柱内特殊硅基质膜， 再通过一系列特殊漂洗液快速的漂洗－离心的步骤，漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质进一步去除， 最后低盐的洗脱液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

近年来对RNA干扰和调节性小RNA的广泛研究迫切需要一种能有效提取15～30核苷酸左右大小RNA（包括siRNA和miRNA）的试剂盒。但是传统的RNA提取方法如硅胶膜不能有效吸附回收，酚/胍抽提和异丙醇或者乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA，对于血清、血浆样本更是由于其自身特点更难提取。本试剂盒的出现很好的解决了这一问题

产品组分：
Lysis buffer————避光50 ml
Wash Solution 1————12 ml（第一次使用前加入28ml 无水乙醇）
Wash Solution 2/3————10 ml（第一次使用前加入42ml 无水乙醇）
RNase-free H2O————10 ml
吸附柱和收集管————50 套

产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.也不需要乙醇沉淀等容易丧失微小分子RNA的步骤。
3.特殊的裂解液配方，可以处理更多的血清/血浆样品。
4.多次柱漂洗确保高纯度，可用于RNAi，RT-PCR，Northern-blot和各种实验。

注意事项
1. 第一次使用前请先在Wash Solution 1 瓶和Wash Solution 2/3 瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
2. 除说明外，所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm 的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
3. 需要自备乙醇，氯*(代"仿")。
4. Lysis buffer 和Wash Solution 1 含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5. RNA 纯度及浓度检测：
一般情况下通过测量OD260 值可以知道RNA 产量，测量OD260/OD280 比值可以是衡量蛋白质污染程度的指标之一，但是由于血清/血浆的RNA 含量特别低，已经低于分光光度计测量的下限，无法测量准确，因此一般无法通过测量OD 值或者比值的方法来判断纯度或者浓度，只能通过下游做荧光定量RT-PCR 来判断产量。同时无细胞的血清/血浆中的RNA 主要是小于100 nt 的小RNA，因此传统的电泳检测RNA 完整性并不适用于血清/血浆RNA。

储存条件：室温，有效期6个月。(lysis buffer需4℃避光保存)


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