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文献和实验
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服务名称 ：免疫荧光染色实验服务
提供商 ：晶莱生物
规格 ：切片
免疫荧光又称免疫荧光抗体。免疫荧光实验原理是将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少，相对使用标记抗体用量偏大。利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
一、制片
一、制片
选无自发性荧光的石英玻片或普通优质玻片，洗净后浸泡于无水乙醇和乙.氧.基.乙.烷等量混合液中。用时取出用绸布擦净。将待检样品如组织块剪成适当大小印压于玻片上。也可采用冰冻切片或石蜡切片样品。
二、固定
除研究细胞表面抗原或不稳定抗原可不固定外，一般均应固定。
固定的作用有三：
1. 防止标本从玻片上脱落。
2. 除去防碍抗原-抗体结合的类脂，使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果。
3. 固定的标本易于保存，如组织切片固定后在-20℃下可保存一年而不改变其染色特性。
固定的作用有三：
1. 防止标本从玻片上脱落。
2. 除去防碍抗原-抗体结合的类脂，使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果。
3. 固定的标本易于保存，如组织切片固定后在-20℃下可保存一年而不改变其染色特性。
标本的固定原则是：
1. 不能损伤细胞内的抗原。
2. 不能凝集蛋白质。
3. 不能损伤细胞形态。
4. 固定后应保持细胞膜的通透性，以允许抗体进入与抗原结合。
1. 不能损伤细胞内的抗原。
2. 不能凝集蛋白质。
3. 不能损伤细胞形态。
4. 固定后应保持细胞膜的通透性，以允许抗体进入与抗原结合。
三、水洗
固定后以冷的0.01 Mol/L pH7.4PBS液浸泡冲洗，最后以蒸馏水冲洗，防止自发性荧光。
四、染色
染色分直接染色法与间接染色法。
1. 材料与试剂
（1）荧光抗体，稀释至应用浓度。
（2）0.01 Mol/L pH7.4PBS液
（3）9份优质甘油加1份pH7.4PBS液即为甘油缓冲液。甘油有减少非特异性荧光的作用。
（4）带盖方盘
2. 直接染色法
（1）将固定好的玻片置于湿盘中，滴加荧光抗体染色液，以覆盖为度，加盖，37℃感做30 min~45min。
（2）PBS冲洗3次，每次冲洗3 min，即3×3冲洗。
（3）蒸馏水冲洗。
（4）滴甘油缓冲液一滴，封片，荧光显微镜检查。
3. 间接染色法
（1） 检查抗原：
①取固定标本，加已知的免疫血清，37℃孵育30 min。
②以PBS液3×3冲洗。
③再加荧光标记的抗抗体，37℃孵育30 min。
④PBS 3×3冲洗。
⑤H2O冲洗，凉干。
⑥加甘油缓冲液，封片、镜检。
①取固定标本，加已知的免疫血清，37℃孵育30 min。
②以PBS液3×3冲洗。
③再加荧光标记的抗抗体，37℃孵育30 min。
④PBS 3×3冲洗。
⑤H2O冲洗，凉干。
⑥加甘油缓冲液，封片、镜检。
（2）检查抗体：
①免疫后动物的淋巴组织涂片，自然干燥，甲醇固定。
②滴加相应抗原液（按1：100~1：500稀释），37℃孵育30 min。
③PBS液3×3冲洗。
④加荧光抗体，37℃孵育30 min。
⑤PBS液3×3冲洗。
⑥水洗，凉干。
⑦加甘油缓冲液，封片、镜检。
晶莱生物病理类实验服务总览表
| 类别 | 服务项目 | 备注 | 说明 |
| 制 片 前 处 理 |
石蜡包埋 | 包埋1块 | 固定后组织按客户要求取材，脱水，包埋成蜡块（进口石蜡） |
| 特殊包埋（细胞、材料、眼球等） | 包埋1块 | 包埋要求难度较高(含特殊位置取材) | |
| 石蜡组织芯片 | 阵列点位包埋 | 客户提供供体蜡块及标本信息 | |
| 软化（肝硬化、皮肤结痂、植物等） | 1块标本软化 | 较为坚硬组织软化处理 | |
| 骨组织脱钙（小） | 1块标本脱钙 | 最大面≤2cm²骨组织脱钙 | |
| 骨组织脱钙（大） | 1块标本脱钙 | 最大面＞2cm²骨组织脱钙 | |
| 骨组织EDTA脱钙（小） | 1块标本脱钙 | 最大面≤2cm²骨组织EDTA脱钙 | |
| 骨组织EDTA脱钙（大） | 1块标本脱钙 | 最大面＞2cm²骨组织EDTA脱钙 | |
| 石蜡白片 | 石蜡白片1片 | 组织防脱载玻片石蜡白片 | |
| 冰冻组织制备 | 冰冻包埋及前处理 | 4%多.聚.甲.醛固定的组织或OCT包裹的新鲜组织（-80℃或液氮内保存，干冰运输） | |
| 冰冻切片 | 冰冻组织切片1片 | 同一组织连续切片3张以上免制备费 | |
| 染 色 |
HE染色 | 染色含切片 | 苏木.精-伊红染色法，观察组织形态 |
| 油红O染色 | 染色含冰冻切片 | 4%多.聚.甲.醛固定，冰冻切片。对组织内脂质（如脂滴）染色 | |
| 番红O固绿染色 | 染色含切片 | 常用于植物、软骨组织形态染色 | |
| Masson染色 | 染色含切片 | 观察组织纤维化和肌纤维的鉴别及组织纤维化程度 | |
| 天狼猩红染色 | 染色含切片 | 观察组织纤维化程度，及偏振光进行胶原亚型的分区 | |
| PAS糖原染色 | 染色含切片 | 观察肝脏、肌肉等组织内糖原的变化；肠胃肺支气管等杯状细胞酸性粘液物质变化 | |
| 阿利新蓝染色 | 染色含切片 | 常用于软骨组织或早幼粒细胞、巨核细胞染色 | |
| 甲苯.胺蓝染色 | 染色含切片 | 观察软骨组织形态或组织内肥大细胞的数量及分布 | |
| 尼氏染色 | 染色含切片 | 观察脑或脊髓等中枢神经系统内神经元尼氏体的变化 | |
| LFB髓鞘染色 | 染色含切片 | 观察神经髓鞘的形态及变化 | |
| 普鲁士蓝染色 | 染色含切片 | 常用于吞噬细胞内铁粒子的含量和定位 | |
| VG染色 | 染色含切片 | 显示组织胶原纤维及肌纤维的形态及变化 | |
| EVG染色 | 染色含切片 | 观察血管弹性纤维的形态及变化 | |
| VonKossa染色 | 染色含切片 | 观察组织内病理性钙沉积情况 | |
| 刚果红染色 | 染色含切片 | 一般用于组织淀粉样变染色 | |
| 维多利亚蓝染色 | 染色含切片 | 用于弹力纤维染色 | |
| 免疫 组化 |
免疫组化预式 | 染色含切片 | 试两个一抗浓度后拍照 |
| 免疫组化正式 | 染色含切片 | 客户提供一抗，常用二抗公司提供 | |
| 免疫组化芯片 | 染色含切片 | 免疫组化组织芯片染色 | |
| 免疫荧光（石蜡-单标） | 染色含切片和拍照 | 需实验前商定拍照倍数及视野 | |
| 免疫荧光（石蜡-双标） | 染色含切片和拍照 | 需实验前商定拍照倍数及视野 | |
| 免疫荧光（冰冻-单标） | 染色含冰冻切片和拍照 | 需实验前商定拍照倍数及视野 | |
| 免疫荧光（冰冻-双标） | 染色含冰冻切片和拍照 | 需实验前商定拍照倍数及视野 | |
| 抗体代购 | 详情请咨询工作人员 | ||
| Tunel | Tunel(POD自带试剂盒) | 染色含切片 | 细胞凋亡染色，客户需提供Tunel试剂盒 |
| Tunel(公司提供试剂盒) | 细胞凋亡染色，公司提供罗氏POD Tunel试剂盒 | ||
| 凋亡试剂盒代购 | 染色含切片 | 详情请咨询工作人员 |
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