RosettaBlue(DE3)感受态细胞

保存条件 ：-70℃

保质期 ：6个月

英文名 ：Rosetta Blue(DE3)

库存 ：50

供应商 ：康朗生物

规格 ：20×100μl

RosettaBlue(DE3)感受态细胞基本信息
感受态细胞名称: RosettaBlue(DE3), Rosetta Blue(DE3)
菌株类型: E.coli
产品目录号: 71059-3, 71059-4
培养基: LB培养基
生长条件: 37 ℃, 有氧
基因型: RosettaBlue(DE3)感受态细胞菌株基因型
抗性: 氯霉素，四环素
质粒转化条件: 42 ℃热激
应用: 蛋白表达
诱导方法: IPTG
菌株特点: RosettaBlue系列菌株衍生于NovaBlue系列感受态细胞，该菌株既具有很高的转化效率，又具有recA endA lacIq 基因突变。对于包含有稀有密码子的真核蛋白，是加强型的蛋白表达菌株。

RosettaBlue(DE3)感受态细胞通过细胞内一个兼容的具有氯霉素抗性的质粒，补充提供了AGG, AGA, AUA, CUA, CCC 和GGA这些大肠杆菌中真核细胞的稀有密码子的tRNA。这对于表达含有稀有密码子的真核细胞蛋白具有很大的促进作用。

DE3是溶源性的 λDE3, 所以在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。

RosettaBlue(DE3)感受态细胞无法使用蓝白斑筛选，因为在细胞中的DE3溶源噬菌体DNA序列上上含有LacZ的α肽段编码序列。

菌株是recA-, endA-, lacIq , 具有很高的质粒转化效率。
RosettaBlue(DE3)感受态细胞操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化。
2. 每100μl感受态加1ug质粒DNA混匀，依次于冰上静置10分钟、液氮5分钟、37℃ 5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
RosettaBlue(DE3)感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
野生型E.coli并不容易转化，RosettaBlue(DE3)感受态细胞这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化，E.coli转化就属于工程转化。