Stbl2感受态细胞

保存条件 ：-70℃

保质期 ：6个月

英文名 ：Stbl2

库存 ：50

供应商 ：康朗生物

规格 ：20×100μl

Stbl2感受态细胞基本信息
感受态细胞名称: Stbl2
菌株类型: E.coli
产品目录号: 10268-019
培养基: LB培养基
生长条件: 37 ℃, 有氧
基因型: Stbl2感受态细胞菌株基因型
抗性: nalidixic acid 萘啶酸
质粒转化条件: 42 ℃热激
应用: 克隆菌株
蓝白斑筛选: 不适用
诱导方法: --
菌株特点:
Stbl2感受态细胞是不稳定质粒DNA例如逆病毒质粒或者含有高度重复序列质粒的优秀克隆扩增菌株。

最大能够适用于>20kb质粒的扩增。

不含有ccdB抗性基因，不能用来扩增含ccdB基因的质粒。

Stbl2含有recA1重组酶缺陷，能够有效防止质粒和基因组的重组发生率。

Stbl2含有endA1限制性内切酶缺陷，能够有效提升质粒抽提的质量。

Stbl2感受态细胞的平板生长最优条件是30 ℃，生长的最优培养基是S.O.C.培养基。

Stbl2感受态细胞来源于JM109感受态细胞。

菌株内的mcrA基因突变和mcrBC-hsdRMS-mrr缺失，允许细胞克隆扩增含有甲基化序列的DNA质粒或者基因组。

Stbl2感受态细胞中包含有α互补序列的质粒，所以本宿主菌不能被用于蓝白斑筛选。
Stbl2感受态细胞操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化。
2. 每100μl感受态加1ug质粒DNA混匀，依次于冰上静置10分钟、液氮5分钟、37℃ 5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
Stbl2感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
野生型E.coli并不容易转化，Stbl2感受态细胞这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化，E.coli转化就属于工程转化。