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文献和实验
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服务名称 :细胞迁移与侵袭实验服务
提供商 :晶莱生物
规格 :次
一、服务介绍细胞迁移是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。细胞迁移是正常细胞的基本功能之一,是机体正常生长发育的生理过程,也是活细胞普遍存在的一种运动形式。胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程中都涉及细胞迁移。检测细胞迁移能力的实验包括划痕实验和Transwell实验。
二、实验原理
细胞划痕实验是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法,在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至实验设定的时间是一种简单易行的检测细胞运动的方法,实验成本低,可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。Transwell的基本原理是将transwell小室放入培养板中,小室内称为上室,培养板内称为下室,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔,上室内添加上层培养液,下室内添加下层培养液。将细胞种在上室内,由于膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
三、实验流程
划痕实验
1. 用marker笔在6孔板背后均匀得划横线;
2. 在孔中加入细胞;
3. 第二天用枪头垂至于背后的横线划痕;
4. 用PBS洗去处划下的细胞,培养不同时间,取样,拍照;
5. 数据处理:每个时间点细胞整体迁移距离=每个时间点距离长度-0时距离;
6. 结果统计分析。
迁移实验(cell migration assay)
实验材料
(1)Transwell chamber: 24-well, 8.0-μm pore membranes (Corning)
(2)细胞培养相关试剂:无血清培养基,10%血清培养基,PBS,0.02%EDTA
(3)固定液:甲醇
(4)染色液:Giemsa染液
(5)封片剂:中性树胶
(6)其他:小镊子,棉棒,载玻片,盖玻片
细胞侵袭实验 (cell invasion assay)
实验材料
(1)Matrigel (BD 5mg/ml),-20℃保存
(2)其余材料同迁移实验
操作步骤
(1)Matrigel在4℃过夜融化;
(2)用4℃预冷的无血清培养基稀释Matrigel至终浓度1mg/ml,冰上操作;
(3)在chamber上室底部中央垂直加入100μl稀释后的Matrigel,37℃温育4-5小时使其干成胶状;
(4)后续步骤同迁移实验(1-8)。
注意事项
(1)Matrigel在过高或过低的温度均易凝固,因此操作所需枪头和离心管应提前在4℃预冷;
(2)铺胶时保证液面水平,胶的厚度均匀一致,切勿产生气泡;
(3)其他注意事项同迁移试验。
Transwell实验
1. 采用未铺 Matrigel 胶的 Transwell 小室用于实验;
2. 制备细胞悬液;
3. 接种细胞;
4. 检测穿过的细胞数;
5. 结果统计分析。
注意事项
(1)根据待测细胞体积大小选择合适孔径的chamber。常用的为8.0-μm孔径(如AGS细胞),如果细胞体积较大可以考虑用10-μm孔径;
(2)根据待测细胞的迁移能力强弱调整细胞数和迁移时间。常规24-well chamber接种细胞数约为2≈5×104/well,迁移时间12≈36小时;
(3)由于Corning公司的24-Transwell内含12个独立的chamber,为了避免操作污染,每次实验可预先另准备一块24孔普通培养板(Corning);
(4)如果细胞迁移能力较弱,下室液体可用3T3细胞无血清培养24小时获得的上清加50μg/ml FN(Fibronectin),具体可查阅相关文献;
(5)细胞悬液加入膜中央,尽量保证液面水平;
(6)固定染色擦洗时动作小心,避免擦去膜底面的细胞。但一定要充分擦净膜表面上未迁移的细胞,以免影响读数。尤其是膜周边上可用细牙签或小镊子缠上湿棉花擦洗,但要小心避免将膜戳破;
(7)Chamber和膜上都无法标记,操作时应小心避免混淆实验组和对照组;
(8)充分晾干,避免残留水分导致镜下聚焦不一致。
四、服务说明
1. 客户提供:细胞株(冻存株或培养好的细胞),所需药品,药物处理方式和浓度。
2. 公司提供:基本实验步骤、图片、数据分析结果、剩余药品。
3. 实验周期:大约2-3周左右,具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定。
服务对象:
1、在职或专职临床研究生、博士生
● 实验室条件的不完备
● 文章设计不完善
● 临床工作繁忙
● 实验条件摸索不成熟
● 科研时间严重不足
● ……
2、地市级三级医院科室主任、主任医师、主治医师等
● 公务繁忙
● 无精力、时间查找文献
● 没有时间寻找领域内新热点
● 科研圈子氛围不够浓厚
● 需要更前沿的科研技术应用
● 晋升、晋职需要
● ……
3、繁重科研任务的临床医生
● 文章设计不完善
● 科研任务繁重忙不过来
● 临床工作繁忙,千头万绪
● 周围环境和条件的局限
● 缺少实验数据
● ……
4、有志于科研的各级医院临床医生/护士
● 奋战在病房一线
● 时间都给了病人
● 有志于科研
● 心有余而力不足
● ……
整体外包服务介绍:
晶莱生物提供全方位科研设计咨询及辅助实施:相关文献查阅、实验流程设计、实验可行性分析、基金标书撰写、课题项目申请、整体实验实施、数据分析与处理、结题报告书写以及课题相关资料培训。
● 根据客户研究方向、基金标书、实验课题外包目标和要求,实验预算等设计可操作执行的详细实验方案。
● 根据客户研究团队的研究基础,帮助客户策划、设计可执行的研究路线及实验方案。
● 帮助客户解决实验方案中需要突破的重要实验问题,优化实验流程。
● 指导客户筛选和确定实验方案中所需要的试剂、抗体及相关耗材。
● 根据客户需求推荐适合客户的其他增值外包服务。
晶莱生物服务流程
晶莱生物实验服务项目
动物实验 | 细胞生物学 | 病理实验 |
消化系统模型 | 细胞培养 | 病理染色 |
胃酸分泌模型 | 普通细胞株 | HE染色 |
脓毒症模型 | 细胞缺氧培养 | 油红O染色 |
胃溃疡模型 | 细胞培养+支架 | 番红固绿染色 |
胰腺炎模型 | 干细胞培养 | Masson染色 |
肝纤维化模型 | 原代细胞分离/提取/培养 | 天狼猩红染色 |
DIO肥胖模型 | 细胞转染/病毒感染 | PAS糖原染色 |
胆结石模型 | Trans well共培养 | 阿利新蓝染色 |
结肠炎(UC)模型 | 细胞增殖 | 甲苯胺蓝染色 |
脂肪肝模型 | 细胞计数 | 尼氏染色 |
急性肝损伤模型 | 生长曲线测定 | LFB髓鞘染色 |
免疫、代谢系统疾病模型 | 存活曲线测定 | 普鲁士蓝染色 |
骨质疏松模型 | ccK-8增殖检测 | VG染色 |
糖尿病模型 | MTT增殖检测 | EVG染色 |
高尿酸血症模型 | CFSE检测增殖-流式检测 | VonKossa染色 |
呼吸系统模型 | BrDU检测-免疫荧光法 | 刚果红染色 |
肺纤维化模型 | 细胞凋亡 | 苏丹黑B染色 |
慢性肺阻塞模型 | Annexin V/PI流式检测细胞凋亡 | Trap染色 |
急性肺损伤模型 | WB检测凋亡相关蛋白 | 抗酸染色 |
哮喘模型 | 透射电镜观察凋亡小体 | 革兰氏染色 |
肺栓塞模型 | Tunel染色(POD法,DAB显色) | AB-PAS染色 |
支气管炎模型 | Tunel(荧光法,含试剂盒) | 亚甲基蓝染色 |
泌尿生殖系统模型 | DNA ladder法 | 苯胺蓝染色 |
慢性肾衰模型 | 细胞周期 | 荧光 DAPI染色 |
急性肾衰模型 | 细胞显微计数 | 普鲁士蓝染色 |
肾间质纤维化模型 | PI染色 | 间苯二酚碱性品红染色 |
肾结石模型 | BrdU渗入法 | 银染 |
肾炎模型 | 免疫荧光染色 | 黑色素染色 |
子宫内膜异位症模型 | PI流式检测细胞周期 | 镀银染色 |
心血管系统模型 | 细胞运动 | PASM 六胺银染色 |
冠心病模型 | Transwell检测细胞迁移 | VG染色 |
心肌梗死模型 | Transwell检测细胞侵袭 | 富尔根染色 |
心脏骤停模型 | 细胞划痕 | 亚甲基蓝染色 |
慢性心力衰竭模型 | 细胞克隆 | 碘-碘化钾染色 |
动脉粥样硬化模型 | 集落形成法/稀释铺板方法 | Goldner三色法染色 |
白血病模型 | 软琼脂克隆法 | PAS-萘酚磺S染色 |
高血压模型 | 毛细管克隆法 | 改良苯酚品红染色 |
神经系统模型 | 体外实验血管生成 | 网状纤维染色 |
脑卒中模型 | 磁珠分选细胞 | β-半乳糖苷酶染色 |
栓塞性脑梗死模型 | 流式分选细胞 | 镀银染色 |
脑出血模型 | 开机费 | movat五色染色 |
脑损伤模型 | 单色 | 维多利亚蓝染色 |
脊髓损伤模型 | 双色 | 免疫组化 |
帕金森模型 | CBA多细胞因子流式检测 | 免疫组化预式 |
老年痴呆模型 | 组织/血液细胞制备 | 免疫组化正式 |
应激模型 | 组织单细胞制备 | 免疫荧光(石蜡-单标) |
骨骼疾病模型 | 中性粒细胞提取 | 免疫荧光(石蜡-双标) |
骨折模型 | 其他样本细胞制备(如血液等) | 免疫荧光(石蜡-三标) |
骨缺损模型 | 外周血PBMC分离 | 免疫荧光(冰冻-单标) |
风湿免疫性关节炎模型 | 线粒体组学 | 免疫荧光(冰冻-双标) |
骨关节炎模型 | 线粒体膜电位检测-流式法 | 制片前处理 |
五官疾病模型 | 线粒体膜电位检测-免疫荧光法 | 石蜡组织包埋 |
眼科疾病模型 | 线粒体ROS生物含量检测--流式 | 特殊包埋(细胞、材料、眼球等) |
鼻腔疾病模型 | 线粒体ROS生物含量检测--免疫荧光 | 软化(肝硬化、皮肤结痂、植物等) |
皮肤疾病模型 | 线粒体通透性转换孔(mPTP) | 骨组织脱钙(小) |
皮肤损伤模型 | 溶酶体免疫荧光法 | 骨组织脱钙(大) |
肿瘤疾病模型 | 线粒体+溶酶体共定位 | 骨组织EDTA脱钙(小) |
原位瘤模型 | 内质网 | 骨组织EDTA脱钙(大) |
转移瘤模型 | 线粒体钙瞬时变化检测-流式 | 石蜡白片 |
皮下植瘤模型 | ATP检测 | 细胞爬片 |
ADP检测 | ||
AMP检测 | ||
流式 | DNA/RNA半定量检测 | 基因编辑工具 |
组织细胞悬液处理 | pcr检测mRNA | 合成(3保1)片段/质粒/引物合成 |
细胞处理 | microRNA检测 | 质粒载体构建 |
血液标本处理 | LncRNA表达量的检测 | 过表达腺病毒载体构建包装 |
细胞刺激培养 | CirRNA表达量的检测 | shRNA腺病毒载体构建包装 |
单色检测 | 凝胶电泳 | 过表达慢病毒载体构建包装 |
双色检测 | 基因合成 | shRNA慢病毒载体构建包装 |
Annexin V/PI凋亡 | <300 | 过表达腺相关病毒载体构建包装 |
细胞周期 | 300-1,500 | shRNA腺病毒载体构建包装 |
1500 - 5000 | 稳转细胞株 | |
>5000 | ||
特殊序列 | ||
ELISA | WB | qPCR |
组织匀浆处理 | 蛋白提取及定量一 | RNA抽提 |
ELISA(不含试剂盒)48T/kit | WB检测一(10孔膜/指标) | mRNA引物设计及合成 |
ELISA(不含试剂盒)96T/kit | 灰度值分析及作图一(10孔膜/指标) | miRNA引物设计及合成 |
ELISA(含国产试剂盒)48T/kit | 蛋白提取及定量二 | LncRNA引物设计及合成 |
ELISA(含国产试剂盒)96T/kit | WB检测二(15孔膜/指标) | CircRNA引物设计及合成 |
灰度值分析及作图二(15孔膜/指标) | mRNA RT-qPCR | |
miRNA RT-qPCR | ||
LncRNA RT-qPCR | ||
CircRNA RT-qPCR |
收费标准/服务周期/提供结果:
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