内皮细胞培养实验服务

服务名称 ：内皮细胞培养实验服务

提供商 ：晶莱生物

规格 ：实验服务

实验操作流程：（培养人脐静脉内皮细胞为例）
1、新生儿脐带：在无菌条件下，于健康产妇分娩后立即取新生胎儿脐带。长度>20 cm，两端扎紧投入到4℃脐带保存液中，1 h内送细胞培养室。
2、剪去脐带两端和脐带上有夹痕及血肿部分，尽量挤干净脐带内血液。
3、用生理盐水冲洗脐带表面至无血色。
4、用输血器内接有穿刺器的软管，找到脐静脉，将软管针头一端插入脐静脉，用止水夹固定，另一端接20 m1注射器，吸取PBS反复冲洗脐静脉直至无血色液体流出为止；将脐带另一端用止血钳夹闭，向脐静脉中灌入0．1％ I型胶原酶溶液，使之充盈，夹闭软管
5、37℃水浴中孵育20 min，其间轻轻挤压并旋转脐带，以使酶溶液充分接触血管内壁
6、 将细胞一酶溶液收集于预先装有温培养液小三角瓶中。用2倍于消化液的温PBS冲洗脐静脉，一并收集于小三角瓶中，将细胞悬液装入10 ml离心管，1 000 r／min离心10 min，弃上清，吹打悬浮，再次离心10 min，重悬细胞并接种于铺有明胶的25 cm2培养瓶中，置于37℃ 5％ C02饱和湿度培养箱中培养，24 h后更换培养液，以后每隔2 d换液1次。
7、脐静脉内皮细胞的传代培养：当原代细胞融合80％以上后，加入 0．05％ 胰蛋白酶一0．02％EDTA 溶液消化，倒置显微镜下观察，当细胞皱缩变圆、彼此分离时弃消化液，加入细胞培养液终止消化，收集细胞悬液。1 000 r／min离心10 min，弃上清，制成单细胞悬液。此时可用0．5％台盼蓝染色，计算活细胞百分率，并以血细胞计数板计数。调整细胞浓度为1×10 个／ml，接种于培养瓶或培养板中继续培养。待细胞长满，彼此融合成片时依上述方法继续传代培养。

实验注意事项：

客户提供：
细胞建模的药品或试剂，细胞（可由晶莱代购）

交付标准：
1、细胞
2、完整项目报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）

晶莱生物服务流程


做实验，找晶莱！您的科研生涯，我们一路相伴！
【平台项目开展范围】慢病毒，腺病毒，RNAi类，分子生物实验，病理实验，免疫学实验，细胞实验，动物实验，蛋白组学实验，芯片类实验，并为广大客户朋友们提供课题设计指导、基金申请指导等服务。

【北京公司】北京经济技术开发区科创十三街12号院德为科技园1号楼5层
【长沙公司】长沙市高新区麓谷大道627号新长海中心A1-1203室

【晶莱生物】已开展了数千个实验外包项目。我们专注于医学课题研究，已从课题申请、方案设计、试剂采购、模型构造、标本检测、数据分析，各个环节积累了数千个成功案例经验，为数千个来自临床的科研工作者解决了大量的科研问题。更多相关实验服务信息请咨询晶莱生物