植物山梨醇脱氢酶sorbital dehydrogenase）活性光度法定量检测试剂盒

保存条件 ：干燥密封保存

供应商 ：赫澎（上海）生物

规格 ：20次

山梨醇氧化酶（sorbital oxidase）为山梨醇代谢的酶蛋白，其分子量为54kd，在未成熟的植物果实中高度表达，随着果实膨大而逐渐下降。山梨醇是一种环状多元醇（cyclic polyols），具有调节果味的作用。基于底物山梨醇（sorbitol），在山梨醇氧化酶的催化下，氧化产生过氧化氢，在过氧化物酶（peroxidase）的作用下，使显色染料还原型邻联茴香胺（reduced o-dianisidine）转化为氧化型邻联茴香胺（oxidized o-dianisidine），在分光光度仪（500nm 波长）下，呈现吸光峰值的变化，来检测样品中山梨醇氧化酶的活性。其反应系统为：




产品内容

HEPENGBIO清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO缓冲液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO反应液（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO底物液（Reagent E） 毫升
HEPENGBIO催化液（Reagent F） 毫升
产品说明书 1份

保存方式

保存HEPENGBIO清理液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；HEPENGBIO反应液（Reagent D）避免光照；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
15毫升锥形离心管：用于反应液配制的容器
DOUNCE匀浆器：用于裂解组织细胞
微型台式离心机：用于样品制备
氧气罐：用于试剂充氧
比色皿：用于比色的容器
分光光度仪：用于比色分析

实验步骤

• 样品准备

1. 准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定1克组织重量
2. （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3. （选择步骤）加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）清洗1次
4. 即刻用刀片切碎组织
5. 放进一个预冷的15毫升锥形离心管
6. 加入预冷的xx毫升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）
7. 涡旋震荡5秒，充分混匀
8. 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约80下）
9. 将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管，放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）
10. 小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
11. （选择步骤）如果上清液含有肉眼可见的残渣，重复离心5分钟一次，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）
12. 即刻移入到1.5毫升离心管
13. 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用HEPENGBIO BCA蛋白质浓度定量试剂盒－HEPENGBIO30031.1）
14. 放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用

• 测读准备

1. 1. 准备好上述制备的样品，置于冰槽里融化
   2. 设定好分光光度仪：波长500nm，间隔1分钟，读数6次（共5分钟），并置零或设置0分钟和5分钟各测读1次
   3. 检测开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂置入冰槽里融化，然后移出xx毫升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C）到新的15毫升离心管，加入xx微升HEPENGBIO反应液（Reagent D）和xx毫升HEPENGBIO底物液（Reagent E），充分混匀后，标记为HEPENGBIO反应工作液，置于冰槽里，避免光照。
   4. （选择步骤）接上氧气进行充氧5分钟后使用（注意：参见注意事项4）

 

• 背景对照测定

1. 1. 移取xx毫升HEPENGBIO反应工作液到新的3毫升比色皿
   2. 加入xx微升HEPENGBIO催化液（Reagent F）
   3. 室温下孵育3分钟
   4. 加入xx微升HEPENGBIO缓冲液（Reagent C