人体组蛋白脱乙酰基酶（histone deacetylase；HDAC）家属分成三类共20多个蛋白：种类I（class I）与酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于细胞核中；种类II（class II）与酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于细胞核和细胞浆里；上述种类的蛋白分子催化结构域含有锌，且曲古菌素A（trichostatin A；TSA）敏感。种类III（class III）为NAD辅助因子必需，又称为sirtuins，与酵母Sir2同源，包括SIRT1至7等。其曲古菌素A（trichostatin A；TSA）不敏感。通过催化组蛋白上赖氨酸残基ε氨基酸的乙酰基团的水解脱离，改变核小体（nucleosome）结构达到调节基因表达，从而调节细胞周期和分化，一旦失控，则会导致肿瘤和衰老。HDAC1（EC3.5.1.98），为55Kd蛋白，482氨基酸残基，与种类I的其它成员具有大于90%同源。HDAC1与各种不同蛋白，包括P53、E2F-1、stat3等，形成转录抑制复合物。并具有恐惧记忆机制相关。一旦异常，会导致胚胎致死、肿瘤扩散、预后不佳等。临床上使用抑制剂，可以抑制肿瘤细胞的生长。其脱乙酰化目标序列为 XXXLys（Ac）X。基于乙酰化多肽具有抗氨基肽酶切离的功能，首先通过比色染料对xiao基苯胺（p-Nitroaniline；p-NA）来标记乙酰化多肽底物， 其次，在特异性抑制剂MS275（Entinostat）的作用下，进行HDAC1的脱乙酰化，后底物进一步在氨基肽酶的催化酶解，释放出具有强烈吸光值的黄色对xiao基苯胺（波长405nm），由此来定量测定组蛋白脱乙酰基酶1的特异活性。其反应系统为：

产品内容

HEPENGBIO 裂解液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO 分离液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO 清理液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO 萃取液（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO 缓冲液（Reagent E） 毫升
HEPENGBIO 底物液（Reagent F） 微升
HEPENGBIO 终止液（Reagent G） 微升
HEPENGBIO 酶解液（Reagent H） 微升
HEPENGBIO 补充液（Reagent I） 微升

HEPENGBIO 专性液（Reagent J） 微升
产品说明书 1 份

保存方式

保存 HEPENGBIO 底物液（Reagent F）、HEPENGBIO 终止液（Reagent G）、HEPENGBIO 酶解液（Reagent H）和 HEPENGBIO 专性液（Reagent J）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里；HEPENGBIO 底物液
（Reagent D）避免光照。有效保证 6 月

用户自备

磷酸盐缓冲溶液（PBS）：用于清洗细胞样品
15 毫升锥形离心管：用于样品处理的容器
1.5 毫升离心管：用于样品操作和保存的容器
（微型）台式离心机：用于细胞预处理培养箱：用于反应物孵育
96 孔板或 100 微升 1 厘米光径比色皿：用于反应和比色的容器酶标仪或分光光度仪：用于比色分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作。一、样品准备

1. 准备好 75cm2 细胞培养瓶或 100mm 细胞培养皿的待测培养细胞（1 至 5 X 107 细胞）
2. 小心抽去培养液
3. 小心加入 10 毫升用户自备的磷酸盐缓冲溶液（PB