产品详情
文献和实验
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保存条件 :干燥密封保存
库存 :现货
供应商 :赫澎(上海)生物
规格 :20次
蛋白激酶A(protein kinase A;PKA),又称cAMP依赖性蛋白激酶(cAMP dependent protein kinase),是第二信使依赖性酶。通过影响腺苷酸环化酶(adenylate cyclase;AC)和磷酸二酯酶(phosphodiesterase)的活性,而决定cAMP水平,达到调节PKA活性,进而调节细胞对于各种外部刺激的反应,包括细胞生长、代谢、DNA复制、细胞分裂、肌动蛋白细胞骨架重排等。该全酶(holoenzyme)具有两个催化亚体和两个调节亚体构成的四联体结构。cAMP结合调节亚体,而释放出活化的催化亚体,产生目标蛋白上丝/苏氨酸
(serine/threonine)的磷酸化,诸如CREB、Histone H1、CREM、NF-κB和核受体等,而调控一系列细胞活动。其磷酸化目标序列为Arg-Arg-X-Ser/Thr或Lys-Arg-X-X- Ser/Thr。蛋白激酶A 至少有两个亚酶:I型亚酶存在于胞浆内,而二型亚酶与细胞膜、细胞器和细胞骨架相关。基于底物XXXXXX,在ATP的存在下, 受到PKA激酶的磷酸化,获得产物磷酸化多肽,进而通过酮酸激酶(pyruvate kinase;PK)和乳酸脱氢酶
(lactate dehydrogenase;LDH)反应系统中,还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide;NAD),其峰值的变化(340nm),来定量分析蛋白激酶A的活性。其反应方式为:
HEPENGBIO 清理液(Reagent A) 毫升
HEPENGBIO 裂解液(Reagent B) 毫升
HEPENGBIO 缓冲液(Reagent C) 毫升
HEPENGBIO 酶促液(Reagent D) 微升
HEPENGBIO 反应液(Reagent E) 微升
HEPENGBIO 底物液(Reagent F) 微升
HEPENGBIO 阴性液(Reagent G) 微升
产品说明书 1 份
保存 HEPENGBIO 清理液(Reagent A)在 4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里,严格避免光照和反复冻融;有效保证 6 个月。
PKA 激酶:用于抑制剂筛选
1.5 毫升离心管:用于样品保存的容器
15 毫升锥形离心管:用于样品处理的容器细胞刮脱棒:用于贴壁细胞脱离
(微型)台式离心机:用于细胞预处理
比色皿或酶标板:用于比色分析操作的容器分光光度仪或酶标仪:用于样品比色分析
(serine/threonine)的磷酸化,诸如CREB、Histone H1、CREM、NF-κB和核受体等,而调控一系列细胞活动。其磷酸化目标序列为Arg-Arg-X-Ser/Thr或Lys-Arg-X-X- Ser/Thr。蛋白激酶A 至少有两个亚酶:I型亚酶存在于胞浆内,而二型亚酶与细胞膜、细胞器和细胞骨架相关。基于底物XXXXXX,在ATP的存在下, 受到PKA激酶的磷酸化,获得产物磷酸化多肽,进而通过酮酸激酶(pyruvate kinase;PK)和乳酸脱氢酶
(lactate dehydrogenase;LDH)反应系统中,还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide;NAD),其峰值的变化(340nm),来定量分析蛋白激酶A的活性。其反应方式为:
产品内容
HEPENGBIO 清理液(Reagent A) 毫升
HEPENGBIO 裂解液(Reagent B) 毫升
HEPENGBIO 缓冲液(Reagent C) 毫升
HEPENGBIO 酶促液(Reagent D) 微升
HEPENGBIO 反应液(Reagent E) 微升
HEPENGBIO 底物液(Reagent F) 微升
HEPENGBIO 阴性液(Reagent G) 微升
产品说明书 1 份
保存方式
保存 HEPENGBIO 清理液(Reagent A)在 4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里,严格避免光照和反复冻融;有效保证 6 个月。
用户自备
PKA 激酶:用于抑制剂筛选
1.5 毫升离心管:用于样品保存的容器
15 毫升锥形离心管:用于样品处理的容器细胞刮脱棒:用于贴壁细胞脱离
(微型)台式离心机:用于细胞预处理
比色皿或酶标板:用于比色分析操作的容器分光光度仪或酶标仪:用于样品比色分析
实验步骤
一、 待测样品准备
- 准备好 25cm2细胞培养瓶或 60mm细胞培养皿的待测培养细胞(1 至 5 X 106细胞)
- 小心加入 毫升 HEPENGBIO 清理液(Reagent A),覆盖生长表面
- 小心抽去清理液
- 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞(注意:避免使用胰酶消化)
- 加入 毫升 HEPENGBIO 清理液(Reagent A),混匀细胞
- 移入到预冷的 15 毫升锥形离心管(注意:悬浮细胞从这一步骤开始)
- 放进 4℃台式离心机离心 5 分钟,速度为 300g
- 小心抽去上清液
- 加入 微升 HEPENGBIO 裂解液(Reagent B),充分混匀 10.转移到预冷的 1.5 毫升离心管
- 强力涡旋震荡 15 秒
- 置于冰槽里孵育 30 分钟
- 放进 4℃微型台式离心机离心 5 分钟,速度为 16000g(或 13000RPM,例如 eppendorf 5415)
- 小心移取 500 微升上清液到新的预冷的 1.5 毫升离心管
- 移取 10 微升进行蛋白定量检测(注意:建议使用 HEPENGBIO Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒 )
- 即刻放进-70℃保存或置于冰槽里继续后续操作二、 测定准备
- 准备好待测样品(例如组织裂解悬液等),置于冰槽里
- 设定好分光光度仪(温度为 30℃):波长为 340nm,间隔 <
赫澎(上海)生物科技有限公司
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