特殊石蜡切片磷脂尼罗红（Nile Red）间接荧光染色试剂盒

保存条件 ：冷冻保存

库存 ：现货

供应商 ：赫澎（上海）生物

规格 ：10次

 脂类物质（LIPIDS）是一类脂溶性（疏水性）的自然分子，分为简单脂质包括脂肪酸（FATTY ACID）及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂；复合脂质包括磷脂、糖脂、硫脂以及脂蛋白；和中性脂质包括甘油、固醇类（STEROL）物质，例如胆固醇。脂类物质在机体中具有能量储存的作用，是膜结构的组成成分和细胞信号分子。尼罗红染色剂（9-diethylamino-5H-benzo[alpha]-phenoxazine-5-one；Nile red）是一种亲脂性的恶嗪类荧光染料。与极性脂类物质，例如磷脂结合后，在特定激发波长543nm的激发下，显示强烈桔红色荧光（散发波长598nm）。其分子式为C20H18N2O2，分子量为318。由于组织切片在包埋前处理和染色前脱蜡的过程中，有机溶剂容易破坏和减少组织中的脂质成分，因此防护和固定组织中的脂质成分是尼罗红染色的关键。

产品内容

HEPENGBIO清理液（Reagent A） 毫升
HEPENGBIO固着液（Reagent B） 毫升
HEPENGBIO乳化液（Reagent C） 毫升
HEPENGBIO净化液（Reagent D） 毫升
HEPENGBIO氧化液（Reagent E） 毫升
HEPENGBIO修复液（Reagent F） 毫升
HEPENGBIO脱蜡液（Reagent G） 毫升
HEPENGBIO补水液A（Reagent H） 毫升
HEPENGBIO补水液B（Reagent I） 毫升
HEPENGBIO补水液C（Reagent J） 毫升
HEPENGBIO补水液D（Reagent K） 毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent L） 微升
HEPENGBIO稀释液（Reagent M） 毫升
产品说明书 1份

保存方式

保存HEPENGBIO染色液（Reagent L）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月

用户自备

无离子水：用于清洗样品
1.5毫升离心管：用于反应液配制和样品操作的容器
无菌手术刀和镊子：用于组织块处理
恒温培养箱：用于组织处理孵育
6孔细胞培养板：用于组织处理的容器
小型玻璃染色缸：用于组织或切片处理的容器
切片机：用于组织切片
明胶化载玻片和盖玻片：用于切片后铺片
荧光显微镜：用于组织细胞染色后观察分析

实验步骤

• 样本固着处理

1. 用无菌手术刀将新鲜组织切成2毫米厚的组织块
2. 即刻用无菌镊子夹起组织块，小心放进xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）中浸泡3秒2次
3. 转移到xx毫升HEPENGBIO固着液（Reagent B）里
4. 室温下浸泡孵育24小时，避免光照
5. 即刻用无菌镊子夹起组织块，小心放进上述xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）中浸泡1小时
6. 小心转移到xx毫升HEPENGBIO乳化液（Reagent C）里（注意：如果组织已经使用福尔马林固定的，则从这一步骤开始）
7. 在56℃恒温培养箱里浸泡孵育48小时，避免光照
8. 准备1个6孔细胞培养板，分别加入xx毫升HEPENGBIO净化液（Reagent D）到3个孔里
9. 再分别加入xx毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A）到另外3个孔里
10. 小心转移组织块到上述6孔板的第一个孔里
11. 室温下孵育1小时
12. 转移组织块到上述6孔板的第二个孔里
13. 室温下孵育1小时
14. 依次直到第六个孔
15. 小心转移组织块到新鲜的xx毫升HEPENGBIO氧化液（Reagent E）里
16. 在4℃冰箱里浸泡孵育24小时，避免光照
17. 小心转移到20毫升用户自备的无离子水里
18. 室温下孵育24小时
19. 小心转移到xx毫升HEPENGBIO修复液（Reagent F）里
20. 室温下浸泡孵育24小时，避免光照
21. 小心转移到20毫升用户自备的无离子水里
22. 室温下孵育8小时（注意：可以孵育24小时）
23. 用绵纸吸干组织快
24. 即刻进行常规石蜡包埋过程的基本操作（包括脱水、浸蜡、包埋等）
25. 取出组织块，进行缓慢石蜡切片，为10微米厚，并铺片在明胶化载玻片上

• 脱蜡处理

1. 取出10片待测的5微米厚的石蜡包埋的组织切片
2. （选择步骤）放进80℃烘箱，孵育30分钟
3. （选择步骤）室温下静置15分钟
4. 按下表依次放进小染色缸里孵育

染色缸	孵育时间
xx毫升HEPENGBIO脱蜡液（Reagent G）	15分钟
xx毫升HEPENGBIO脱蜡液（Reagent G）	15分钟
xx毫升HEPENGBIO