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文献和实验
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保存条件 :干燥密封保存
供应商 :赫澎(上海)生物
规格 :100次
细胞周期是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要指标。通过DNA结合染料,借助细胞流式仪,测定出DNA含量,根据DNA含量随着细胞周期的不同而发生变化,来确定和区别细胞周期的不同阶段。流式细胞术(FLOW CYTOMETRY)是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体的。凋亡细胞是在正常G0/G1峰细胞群前出现亚二倍体峰(sub-G1)细胞群。
产品内容
HEPENGBIO清理液(Reagent A) 毫升
HEPENGBIO裂解液(Reagent B) 毫升
HEPENGBIO染色液(Reagent C) 微升
HEPENGBIO去干扰剂(Reagent D) 毫升
HEPENGBIO保存液(Reagent E) 毫升
产品说明书 1份
保存方法
保存HEPENGBIO去干扰剂(Reagent D)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;HEPENGBIO染色液(Reagent C)避免光照,有效保证6月
用户自备
HANKS平衡盐溶液(HEPENGBIO12022)或PBS缓冲溶液(HEPENGBIO12033):用于清洗细胞
胰蛋白酶乙er胺四乙酸混合液(HEPENGBIO12024):用于细胞脱离
完全细胞培养液(HEPENGBIO12052):用于中和胰蛋白酶的处理
15毫升锥形离心管:用于细胞收集的操作
1.5毫升离心管:用于细胞染色的容器
台式离心机:用于细胞收集的操作
细胞流式仪:用于细胞荧光分析
实验步骤
实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO去干扰剂(Reagent D)置入冰槽里融化。移出xx微升HEPENGBIO裂解液(Reagent B)到新的1.5毫升离心管,加入xx微升HEPENGBIO染色液(Reagent C)和xx微升HEPENGBIO去干扰剂(Reagent D),混匀后标记为1号工作液;再移出xx微升HEPENGBIO保存液(Reagent E)到新的1.5毫升离心管,加入xx微升HEPENGBIO染色液(Reagent C),混匀后标记为2号工作液。工作液置于暗室里,避免光照。然后进行下列操作。
产品内容
HEPENGBIO清理液(Reagent A) 毫升
HEPENGBIO裂解液(Reagent B) 毫升
HEPENGBIO染色液(Reagent C) 微升
HEPENGBIO去干扰剂(Reagent D) 毫升
HEPENGBIO保存液(Reagent E) 毫升
产品说明书 1份
保存方法
保存HEPENGBIO去干扰剂(Reagent D)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;HEPENGBIO染色液(Reagent C)避免光照,有效保证6月
用户自备
HANKS平衡盐溶液(HEPENGBIO12022)或PBS缓冲溶液(HEPENGBIO12033):用于清洗细胞
胰蛋白酶乙er胺四乙酸混合液(HEPENGBIO12024):用于细胞脱离
完全细胞培养液(HEPENGBIO12052):用于中和胰蛋白酶的处理
15毫升锥形离心管:用于细胞收集的操作
1.5毫升离心管:用于细胞染色的容器
台式离心机:用于细胞收集的操作
细胞流式仪:用于细胞荧光分析
实验步骤
实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO去干扰剂(Reagent D)置入冰槽里融化。移出xx微升HEPENGBIO裂解液(Reagent B)到新的1.5毫升离心管,加入xx微升HEPENGBIO染色液(Reagent C)和xx微升HEPENGBIO去干扰剂(Reagent D),混匀后标记为1号工作液;再移出xx微升HEPENGBIO保存液(Reagent E)到新的1.5毫升离心管,加入xx微升HEPENGBIO染色液(Reagent C),混匀后标记为2号工作液。工作液置于暗室里,避免光照。然后进行下列操作。
- 准备1瓶25cm2细胞培养瓶的待测细胞,铺满率达70%(约1百万细胞数)
- 小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管(收集漂浮细胞)
- 加入2.5毫升用户自备的HANKS平衡盐溶液或PBS缓冲溶液到细胞培养瓶,覆盖培养瓶表面
- 小心移出2.5毫升清洗液到上述15毫升锥形离心管
- 加入1毫升胰蛋白酶乙er胺四乙酸混合液到细胞培养瓶,铺满整个培养平面
- 置入37℃培养箱1分种
- 振动培养瓶,使细胞脱落,然后加入5毫升用户自备的完全细胞培养液
- 移入到上述15毫升锥形离心管(悬浮细胞从这一步骤开始)
- 放进台式离心机离心5分钟,速度为300g
- 小心抽去上清液
- 加入xx毫升HEPENGBIO清理液(Reagent A)到15毫升锥形离心管,混匀
- 放进台式离心机离心5分钟,速度为300g
- 小心抽去上清液
- 加入500微升1号工作液,用200微升枪头上下轻柔抽吸,混匀细胞颗粒群(可以移入到1.5毫升离心管或细胞流式仪专用测试管)
- 在暗室里室温下孵育60分钟
- 加入500微升2号工作液,用200微升枪头上下轻柔抽吸,混匀
- 移入到细胞流式仪专用测试管(可放进4℃冰箱里待测)
- 即刻进行细胞流式仪分析:波长488nm氩离子激光(或488nm激发波长,610nm散发波长),观察50000个细胞以
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