EpiSight™ Bisulfite Conversion Kit Ver.2 DNA重亚硫酸盐转化试剂盒

EpiSight^TM Bisulfite Conversion Kit Ver.2

DNA重亚硫酸盐转化试剂盒

Enhanced Bisulfite Reaction抑制因NaHSO3反应的DNA分解，扩增长链长度。

通过添加Bisulfite溶液和反应促进剂（Enhancer），能抑制模板DNA的分解，能让胞嘧啶转化为尿嘧啶的效率大幅度上升。使用离心柱能使DNA纯化操作更加简便。

结合专用的Taq DNA Polymerase，即使是NaHSO3反应后，PCR扩增比较困难的碱基序列也能稳定且高效地扩增。

◆特点

●　离心柱操作简单

●　Enhancer抑制DNA分解

●　有效扩增富含CpG的序列

●　热启动聚合酶防止非特异性扩增

有以下需求的可以考虑使用本产品

●　扩增长链进行高效分析

●　非甲基化胞嘧啶不转换为尿嘧啶的情况

●　甲基化胞嘧啶转换为尿嘧啶的情况

●　想提高PCR扩增效率

◆试剂盒内容（kit 内容）

EpiSight^TM Bisulfite Conversion Kit Ver.2（20次）

Bisulfite solution	11.8ml×1
Enhancer	100µl×1
吸附缓冲液	10ml×1
洗涤液	4.8ml×1
Desulfonation buffer（脱磺缓冲液）	1ml×1
洗脱缓冲液	500µl×1
离心柱	20个

EpiSightTMBisulTaqTM DNA Polymerase,recombinant,Solution Ver.2（20次）

BisulTaqTM DNA Polymerase,recombinant,Solution Ver.2	10µl×1
10×反应缓冲液	100µl×1
dNTPs溶液（各 2mmol/l）	100µl×1

◆使用例1

以小鼠ES细胞（胚胎干细胞）和M1细胞（白血病衍生细胞）的基因组DNA为模板，经过亚硫酸盐处理后，PCR扩增干细胞未分化标记FGF4启动子区。 PCR扩增的链长是521bp，CpG二核苷酸数为61位，对于NaHSO3 PCR扩增链较长，因为 GC含量高，被认为是对三维结构影响较大的区域。

ES细胞有干细胞未分化标记FGF4的mRNA表达，启动子区为非甲基化状态；M1细胞没有用于体细胞分化的Fgf4的mRNA表达，被认为启动子区处于甲基化状态。

●　样本：小鼠ES细胞和小鼠M1细胞的基因组DNA、

●　PCR扩增链长：521bp（小鼠Fgf4启动子区）

●　CpG：61位

●　PCR扩增区域GenBank Accession No.

●　AC_149593 : 230224–230744

结果

ES细胞和M1细胞的PCR扩增产物在克隆后，得到分析11个样本的碱基序列。小鼠ES细胞的Fgf4启动子区为非甲基化状态。小鼠M1细胞的Fgf4启动子区为甲基化状态。

◆使用例2

　　以Lambda DNA为模板，通过使用该试剂盒和DNA聚合酶在Bisulfite反应后，扩增910bp目的区域，分析碱基序列。Lambda DNA中所有的胞嘧啶都是非甲基化，Bisulfite反应后全部被转化为尿嘧啶，预测PCR扩增产物中不存在胞嘧啶。

●　样本：Lambda DNA

●　非甲基化胞嘧啶：150个

●　PCR扩增链长：910pb

●　PCR扩增区域GenBank Accession No NC_001416 : 26062–269

结果

下图所示，不存在胞嘧啶，150处的胞嘧啶全部转化为胸腺嘧啶。

以往的Bisulfite法中，DNA分解严重，条件设置困难，本产品能简单地成功实现900bp以上的PCR产物扩增。