基因定点突变试剂盒哪里卖

保存条件 ：2～8℃

保质期 ：长期

英文名 ：Site-directed Gene Mutagenesis Kit

库存 ：842

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

规格 ：10次

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

基因定点突变试剂盒哪里卖是高品质的克隆与表达，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多基因定点突变试剂盒等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。

基因定点突变试剂盒哪里卖
英文名：Site-directed Gene Mutagenesis Kit
编号：YT027
规格：10次
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博

我公司生产的基因定点突变试剂盒可以用于点突变，多个邻近密码子的突变，单个或多个邻近密码子的缺失(deletion)或插入(insertion)。
本试剂盒是一个利用目前最新的基因点突变技术设计而成的试剂盒。只需通过基于PCR的突变质粒的合成，和基于Dpn I的模板质粒的消化，转化培养以及后续的酶切或测序鉴定，即可得到预期的突变质粒(参考图1)。累计操作时间不足2小时即可完成基因的定点突变。
参考图1，使用本试剂盒时需要先设计长度通常为30个碱基以上的互补的两个引物，在引物中含有预期的突变位点。然后以待突变的质粒为模板，用这两个引物进行PCR扩增反应。这样可以产生含有预期的突变位点的双链质粒，但这个双链质粒中有两个nick位点。待突变的质粒通常来源于大肠杆菌等细菌，在细菌中会被甲基化修饰，而在体外通过PCR扩增得到的质粒不会被甲基化。这样用甲基化酶Dpn I处理，可以消化掉待突变的质粒模板，而使通过PCR扩增出来的含有突变位点的质粒被选择性地保留下来。这样把Dpn I处理过的产物转化细菌后，质粒中有两个nick位点可以被大肠杆菌修复，得到的克隆就会含有预期的突变质粒了。
本试剂盒提供了DH5α甘油菌，可用于感受态细菌的制备。
本试剂盒共可以进行十次基因定点突变反应。
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
需自行配制LB液体培养基和LB平板以用于细菌的培养。
需自行设计和合成用于基因定点突变的引物。需自备用于细菌转化的试剂。
使用本试剂盒前请先阅读后面的常见问题。

使用说明：
1. 引物设计：
用于特定基因突变的引物需要单独设计，请参考如下一些基本原则进行设计：
(1) 共需设计两条互补的引物。可以先集中设计一条，然后就可以得到互补的另一条引物。
(2) 引物的长度通常为25-45个碱基。
(3) 引物中突变位点任何一侧都必需满足4X(GC碱基数)＋2X(AT碱基数)≥45。但引物也不宜过长，否则通常会形成非常稳定的二级结构。通常把突变位点两侧的碱基数控制在15个左右，且使两侧按照上述计算得到的数值相近。
例如引物为agtcaggccaattcgaagcagtcgaattgccaag，其中蓝色的aag为突变位点，则
左侧：4X(GC碱基数)＋2X(AT碱基数)＝4X8＋2X7＝46≥45
右侧：4X(GC碱基数)＋2X(AT碱基数)＝4X8＋2X8＝48≥45
(4) 在可能的情况下，尽量把引物的GC含量控制在40%-60%。
(5) 在可能的情况下，尽量使引物不要产生非常稳定的二级结构和引物二聚体。二级结构和二聚体可以通过一些软件进行分析。
(6) 最好使用经过PAGE纯化的引物或更高纯度的引物。
2. 引物的配制：
如果合成得到的一个引物A的量是20nmol，另外一个互补引物B的量是19nmol。在引物A中加入200微升水，配制成浓度为100μM，在引物B中加入190微升水也配制成浓度为100μM。吸取20微升100μM引物A和20微升100μM引物B到一新的离心管中，再加入160微升水，混匀后即可得到可以直接用于基因定点突变反应的引物(10μM each)。
3. 待突变模板质粒的选择：
选择GC含量在40-55%的待突变模板质粒，并且每一个50bp左右的局部GC含量最好也不超过70%。如果GC含量过高，请先把目的基因克隆到其它合适的载体上，再进行基因定点突变反应。另外目的基因GC含量最好也在40-55%的范围，并且每一个50bp左右的局部GC含量最好也不超过70%。如果目的基因GC含量过高，而突变位点不在高GC含量区域，可以先把该基因的不含高GC含量的一个区域克隆出来，进行定点突变，然后再把突变后的片断克隆回原基因中。如果必需使用高GC含量的质粒模板，或者有局部高GC含量的质粒模板，请另外使用专门用于高GC含量模板的PCR反应试剂。必需使用从dam＋的大肠杆菌(这类菌中质粒可以被甲基化)中抽提得到的质粒用于基因定点突变。常用的大部分大肠杆菌都是dam＋的，包括DH5α、JM109等。
4. 基因定点突变反应：
(1) 如下设置基因定点突变反应体系：
Nuclease-Free Water ?微升
Reaction Buffer(10X) 5微升
引物(10μM each) 2微升
dNTP Mix(2.5mM each) 4微升
待突变模板质粒(0.5μg) ?微升
总体积 49微升
按照上面的顺序依次加入各种试剂。在上述反应体系中，根据待突变模板质粒的量，计算出需加入的Nuclease-Free Water的量，使总体积为49微升。适当混匀后，加入1ul Pfu DNA Polymerase，混匀。如果用的PCR仪没有热盖，在反应体系上加入一滴矿物油(mineral oil)以防止蒸发。
5. Dpn I消化：
PCR反应后，直接在PCR反应体系中加入1微升Dpn I，混匀后37℃孵育1小时。37℃孵育可以在PCR仪上进行，也可以在水浴锅中进行。Dpn I消化完毕后可以直接用于转化，或者-20℃保存备用。
6. 转化、挑克隆鉴定：
感受态细菌的转化效率必需至少在107以上，否则很难得到克隆。根据所使用的感受态细菌，加入尽量多的经过Dpn I消化后的突变产物用于转化。通常每100微升感受态细菌中可以加入5-10微升经过Dpn I消化后的突变产物。按照所使用的感受态细菌的操作方法进行操作，在涂板前通过离心浓缩的办法，把所有被转化后的细菌，全部涂布到含有适当抗生素的平板上，培养过夜。通常会得到50个以下的克隆。如果发现克隆有上千个，那么肯定是有什么地方出了问题。对于得到的克隆，可以先挑克隆小抽酶切鉴定。以确认得到的质粒的大小和质粒中插入片断的大小与预期结果是否相符。取3-5个酶切鉴定正确的克隆去测序，以最终确认得到的克隆是否是预期的突变克隆。通常大约每2个克隆中会得到一个预期的突变克隆。但有时也可能会因为随机因素，会测序了3-5个克隆才得到一个预期的突变克隆。
常见问题：
1. 转化后没有克隆或克隆数极少：
(1) 感受态细菌效率不够高，请检测一下感受态细胞的效率，确保转化效率在107以上，当然高一些更好。
(2) 把Dpn I消化后的产物用常规的乙醇沉淀方法进行沉淀，然后溶解在较小的体积中。这样就可以把所有的产物全部用于转化。
(3) 优化基因定点突变中的PCR参数。可以把最初的95℃变性时间延长为2分钟，循环中95℃变性的时间延长至1分钟，把循环中的68℃的延伸时间改为1.5分钟/kb 至2分钟/kb，退火可以改为60-55℃或65-55℃等的touch down，退火时间也可以适当延长。
(4) 引物设计有问题。通过突变反应中的PCR没有很好地扩增出预期的突变质粒。
(5) 如果使用矿物油(mineral oil)，在转化时如果把矿物油带入感受态菌，会严重影响转化效率。
2. 有克隆，但没有或很难检测到预期的突变克隆：
(1) Dpn I消化效果不佳。一种可能是加入Dpn I后，由于该酶在甘油中，会迅速下沉，如果没有混匀就会严重影响Dpn I的消化作用。另一种可能是Dpn I由于保存不当或保存时间过长等原因导致活性下降，这时可以适当延长消化的时间至1.5-2小时。
(2) 使用的待突变的模板质粒量过多，导致Dpn I消化时不完全。我们这里推荐的模板质粒用量0.5微克，已经是模板质粒用量的上限，不能再使用更多的模板质粒了。
(3) 尽量避免多次反复冻融dNTP。可以把dNTP适当分装后再使用。
3. 有突变克隆，但突变位点不是预期的位点：
(1) 引物设计不佳，并且PCR反应中退火温度过低，导致引物退火到错误的地方。
(2) 引物质量较差，没有经过PAGE纯化。这样引物中通常会含有比设计的引物要短的特异性较差的引物，容易导致非预期的突变。
欲咨询购买基因定点突变试剂盒哪里卖，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：
ARB12471 大鼠胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)酶免分析 Rat cholecystokinin,cck ELISA KIT
SJ0743 小鼠白细胞分离液
ARB12881 小鼠丙酮酸脱氢酶E1(PDH E1)ELISA检测服务 Mouse pyruvate dehydrogenase-e1,pdh e1 ELISA KIT
ARB11426 人热休克因子1(HSF-1)尿液中含量检测 Human heat shock factor 1,hsf1 ELISA KIT
PY02-123 氯化钠蔗糖琼脂 250克
ARB12564 大鼠胸腺基质淋巴生成素(TSLP)定量分析 Rat thymic stromal lymphopoietin，tslp ELISA KIT
3-吲哚丁酸 Ammonium citrate tribasic 133-32-4
ARB12569 大鼠脑肠肽(BGP/Gehrelin)elisa检测操作说明书 Rat brain-gut Peptides,bgp/gehrelin ELISA KIT
KG203 快速DNA提取检测试剂盒
F030433 胶体金标记山羊抗人IgG(H+L)抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG*GOLD
BL0617 镍-琼脂糖凝胶H.P Ni Sepharose H.P
盐酸土霉素 Chloroquine diphosphate 2058-46-0
ARB10979 人免疫球蛋白轻链λ(λ-IgLC)酶免分析 Human lambda immunoglobulin light chain,λ-iglc ELISA KIT
基因定点突变试剂盒哪里卖关键词：基因定点突变试剂盒,YT027,Site-directed Gene Mutagenesis Kit
PY01-010 干酪素 500克
BTN130901 酵母生产及产孢培养基 Growth and Sporulation Medium
ARB10602 人血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-Ⅳ)Elisa分析 Human platelet membrane glycoprotein Ⅳ,gp-Ⅳ ELISA KIT
溴百里酚蓝钠盐 Dopamine hydrochloride 34722-90-2
BL1117 DAPI溶液(1mg/ml)
BL0906 FITC标记兔抗猴IgG抗体
F020107 兔抗沙丁胺醇抗体 Rabbit Anti-salbutamol
F050311 小鼠IgM抗体 Mouse IgM
SJ0707 X-Gal 20mg/ml
PY04-098 PI混合附加试剂 5ML/支 每支添加于95ml灭菌冷却至50李斯特显色培养基基础中，用于李斯特氏菌菌属细菌的快速分类与鉴别
2,5-二羟基苯甲醛 5-Nitrouracil 1194-98-5
F050315 鸡IgY抗体 Chicken IgY
F020231 兔抗绵羊/山羊IgG抗体 Rabbit Anti-Goat IgG
ARB13653 兔子瘦素(LEP)血清中含量检测 Rabbit leptin,lep ELISA KIT
BL0818 HRP标记兔抗马IgG抗体
ARB12393 大鼠单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8)代做ELISA实验 Rat monocyte chemotactic protein 2,mcp-2 ELISA KIT
BL0898 FITC标记羊抗人纤维蛋白原抗体
ARB11703 人雄激素受体(AR)Elisa方法检测 Human androgen receptor,ar ELISA KIT
基因定点突变试剂盒哪里卖关键词：基因定点突变试剂盒,YT027,Site-directed Gene Mutagenesis Kit
PY02-238 李氏菌选择性培养基基础(MMA) 250克
ARB10476 人白介素16(IL-16)elisa检测说明书 Human interleukin 16,IL-16 ELISA KIT
ARB13180 小鼠透明质酸结合蛋白(HABP)检测服务 Mouse hya]uronate binding protein,habp ELISA KIT
HC0052 (带刻度)袋装吸头
F040320 大鼠IgG抗原 Rats IgG
ARB11673 人维生素E(VE)免费代测 Human vitamin e,ve eELISA KIT
F030101 HRP标记小鼠抗乙肝核心抗原抗体 Monoclonal Mouse Anti-HBcAg*HRP
ARB11368 人前列腺素D合成酶(PGDS)酶免分析 Human prostaglandin d synthase,pgds ELISA KIT
5141-20-8 亮绿 Light Green
ARB14178 人免疫球蛋白G4(IgG4)ELISA检测服务 Human immunoglobulin G4 (igG4) ELISA KIT
ARB10321 人内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)elisa检测说明书 Human endocrine gland vascular endothelial growth factor,eg-vegf ELISA KIT
PY04-082 吖啶黄素 1.5mg/支×10支 每支添加于100mlEB增菌液培养基基础中，用于单增李斯特氏菌的增菌培养
PBS缓冲液 Zein
人纤溶酶 Sinapic acid 9001-90-5
ARB11778 人新生儿促甲状腺素(N-TSH)酶标法分析 Human neonatal thyroid stimulating hormone,n-tsh ELISA KIT
BTN120708 凝血酶 Thrombin
ARB11188 人降钙素(CT)Elisa分析 Human calcitonin,ct ELISA KIT
BTN120419 大肠杆菌DNA连接酶 E.coli DNA Ligase

我公司强烈推荐克隆与表达系列产品，热情期待您的咨询选购基因定点突变试剂盒哪里卖。