High Affinity HotStart Taq（ET108）

供应商 ：天根生化科技（北京）有限公司

CAS号 ：/

规格 ：250U，5U/μl/500U，5U/μl

产品简介

本产品中的High Affinity HotStart Taq是TIANGEN Taq DNA Polymerase 和其单克隆抗体的混合制品，适用于HotStart PCR实验。在PCR反应高温加热前，Taq单克隆抗体会与Taq酶结合，抑制其聚合酶活性。本产品中高亲和力抗体可以保证在常温条件下完全屏蔽Taq酶活性，使整个反应体系具有很高的特异性。另外，本产品中的Taq DNA Polymerase具有较高的模板亲和力，可以提高扩增的效率以及特异性。10×HA Buffer是特别为该酶所优化的PCR反应缓冲液，可以保证该酶的最佳性能。5×Probe qPCR Buffer是特别为探针法定量PCR用户所优化的反应添加剂，在实验中配合10×HA Buffer使用，可使本产品用于探针法定量PCR反应中，从而使得本产品具有更加广泛的应用范围。另外，该试剂盒所产生的PCR产物3’末端为A，可直接用TA载体克隆。

试剂盒特点

1. 高亲和体系：High Affinity HotStart Taq是特异性抗体修饰的热启动型DNA聚合酶，其抗体亲和力高；同时Taq DNA Polymerase具有较高的模板亲和力，具有稳定的扩增效率，和高的特异性；该酶配合精心优化的Buffer体系，使得PCR反应同时具有灵敏度高的优点。

2. 稳定性强：对于复杂模板，低拷贝模板的PCR反应以及多重PCR反应等普通DNA聚合酶无法完成的实验，本产品都具有较高的反应成功率。

3. 应用广泛：本产品不但适用于普通PCR分析，还适用于定量PCR分析。

储存条件

收到本产品后，请立即置于-20℃保存。在-20℃条件下，本产品可保存1年。从-20℃取出使用时，将冻存的10 × HA Buffer和5 × Probe qPCR Buffer融解，然后轻轻颠倒混匀，待溶液完全均一后再行使用。如需一段时间内经常取用，可在2-8℃条件下储存3个月，但要避免反复多次冻融。

注意事项

1．在进行普通PCR反应和染料法定量PCR反应时，不需要额外的加入5×Probe qPCR Buffer，只有在进行探针法定量PCR时才需要额外加入5×Probe qPCR Buffer。

2．在进行探针法定量PCR时，引物终浓度为250 nM，探针终浓度为200 nM可以在大多数体系中获得良好的扩增结果。如果需要进一步优化引物浓度的，可以在50-900 nM范围内调整；需要进一步优化探针浓度的，可以在100-500 nM范围内调整。

实验例1-ET108可用于多重PCR扩增

采用不同品牌热启动Taq DNA聚合酶以人293T细胞基因组为模板分别做小片段和大片段的多重PCR扩增（片段大小见图示），TIANGEN ET108显示出优秀的多重扩增能力。
M.TIANGEN DNA Marker Ⅲ；1.T品牌A产品；2.T品牌B产品；3.T品牌C产品；4.Th品牌同类产品；5.TIANGEN ET108

实验例2-ET108是配制染料法qPCR试剂的优秀原材料

建立染料法Real-Time PCR反应体系： 反应程序：

采用ET108配制的SYBR GreenⅠ荧光定量试剂检测人Hela细胞总RNA中的GAPDH基因，1μg总RNA由FastKing RT Kit（KR116）试剂盒反转录得到cDNA，之后分别稀释5倍，50倍，500倍，5000倍，50000倍为模板进行扩增。结果显示，不同浓度梯度模板扩增得到的Ct值跨度均一，熔解曲线峰型特异，标准曲线线性化良好，扩增效率接近100%。说明ET108是配制染料法qPCR试剂的优秀原材料。