CO-IP检测/WB检测/ChIP/免疫组化/免疫荧光

服务名称 ：CO-IP检测/WB检测/ChIP/免疫组化/免疫荧光

提供商 ： 威斯腾生物

CO-IP检测
免疫共沉淀（Co-IP）主要原理是将纯化的抗体直接固定在琼脂糖基质上，从细胞裂解的液或其他复杂混合物中分离天然蛋白复合体。免疫共沉淀是研究蛋白：蛋白相互作用的一种常用方法，即利用抗体去免疫沉淀特定抗原（诱饵蛋白）并且共沉淀任何于该抗原相互作用的蛋白（目的蛋白）。
免疫共沉淀操作步骤
1、取 4℃保存的抗体固定柱，4℃ 1500 X g 离心 1min，弃滤液；
2、加入200μl IP裂解液洗涤离心柱，4℃ 1500 X g 离心 1min，弃滤液；
3、加入200μl预冷的 PBS洗涤离心柱，4℃ 1500 X g 离心 1min，弃滤液，于纸上吸干柱头液体，塞紧塞子；
4、加入（使用对照琼脂糖树脂预处理细胞裂解液：4）保存的滤液，拧紧盖子，4℃孵育3.5h；
5、安装收集管，取下并保留塞子，旋松盖子，4℃ 1500 X g 离心 1min，保留滤液；
6、加入200μl预冷的 PBS洗涤离心柱3次，4℃ 1500 X g 离心 1min，弃滤液；
7.安装收集管，向离心柱中树脂斜面加入10μl Elution Buffer，1500 X g 离心 1min，保存滤液；加入50μl Elution Buffer，室温放置5min，1500 X g 离心 1min，保存滤液。

WB检测
免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(Western blotting)，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。
主要实验步骤如下：
总蛋白提取
（1）组织剪切成细小的碎片。每100mg组织加入1mL RIPA裂解液。用玻璃匀浆器匀浆20次。
（2）将匀浆物转移到1.5 mL离心管。12,000rpm，4 oC离心5min，吸取上清，即可进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
蛋白浓度测定（BCA测蛋白浓度）
检测样品的测定
检测样品测定时，同 BSA 标准品溶液同时进行测定。
（1）分别取100 μL检测样品（稀释100倍）加入到微孔板中，每个样品取2个平行样进行测定。
（如果必要，也可选择与BSA标准品溶液相同的稀释方法稀释检测样品后测定）
（2）加入100 μL工作液后，立即混匀。
（3）37℃水浴中反应60min后，冷却至室温。
（4）酶标仪波长设定在562nm 处进行测定。用水校零。尽可能在20min内检测完毕所有样品。
（5）各样品溶液的吸光度值减去Blank值的平均值，根据标准曲线计算出检测样品的蛋白浓度。
SDS－PAGE电泳
（1）将长短玻璃板对齐后按照方向放入制胶夹中卡紧，然后垂直卡在制胶架子上准备灌胶。
（2）配制15％和10%分离胶，加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将胶加至适量高度（绿线附近）后，轻柔加上双蒸水压胶。
（3）当水和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝了。再等3min使胶充分凝固就可倒去胶上层水并用滤纸将水吸干。
（4）配制5％的浓缩胶，加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳子插入浓缩胶中。
（5）待浓缩胶凝固后，将含胶的玻璃板加入电泳夹卡紧，放入电泳槽（电极红对红，黑对黑）。
蛋白结果图：

灰度分析：


柱状图：


染色质免疫共沉淀（ChIP）
染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation, ChIP)是研究蛋白质与DNA相互作用的经典实验方法。它是基于体内分析发展起来的方法，能真实、完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白，是目前确定与特定蛋白结合的基因组区域或确定与特定基因组区域结合的蛋白质的最好方法。随着新一代测序技术的成熟与发展，整合了染色质免疫共沉淀与高通量测序技术的ChIP-Seq，是研究目标靶蛋白与DNA相互作用的又一技术突破，可应用于组蛋白特异性修饰位点、转录因子结合位点等的研究。
技术特点
全基因组覆盖： ChIP-Seq可在全基因组范围对蛋白结合位点进行筛选与鉴定
高灵敏度：每个样本可获得数百万条的序列标签，可发现研究基因组上稀有的蛋白结合位点
高精确率：可获得高水平的信噪比数据，准确区分真实事件与噪音，精确定位蛋白结合位点
高性价比：仅需较少的数据量即可鉴定全基因组范围内的结合位点

免疫组化（IHC）
免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

免疫荧光
免疫荧光染色：主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来显示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗结合，其次是带有荧光基团的二抗识别并结合一抗，在激光共聚焦系统下即可观察到荧光。染色程序分为两步，第一步，用已知未标记的抗体（Anti LC3II）加到未知抗原样本上；第二步，加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体（Anti Alexa Fluor 647）。如果第一步发生了抗原抗体反应，荧光标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结合，从而可鉴定抗原。
我公司可以提供单标、双标及三标的免疫荧光服务。

实验服务流程

威斯腾生物服务项目

分子生物学类	蛋白质与免疫学	动物实验
实时荧光定量PCR	单克隆抗体制备	帕金森疾病模型
免疫共沉淀（Co-IP）	多克隆抗体制备	抑郁症动物模型
ELISA（酶联免疫吸附法）技术	Western-blot 实验服务	脊髓损伤模型
生化指标检测	蛋白双向电泳实验服务	脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测	原核蛋白表达纯化	骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀（ChIP）	真核蛋白表达纯化	心肌缺血模型
GST pull Down	ITRAQ定量蛋白质组学	心力衰竭模型
	SLAC蛋白组学	肺动脉高血压动物模型
		高血压模型
病毒类	实验课题整体外包	粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化	整体课题外包	大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化	细胞整体实验外包	慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化	动物整体实验外包	过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化		肺炎大鼠模型
		肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片	原代细胞培养	肝纤维化模型
细胞因子芯片	骨髓间充质干细胞培养	胆结石模型
生长因子芯片	脂肪干细胞培养	急性胰腺炎模型
信号通路磷酸化水平检测芯片	心肌成纤维细胞培养	急性肾衰竭模型
BioPlex悬浮芯片	软骨细胞培养	体内血栓模型
生长因子芯片	血管内皮细胞培养	关节炎模型
炎症因子芯片	神经元细胞培养	I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片	内皮组细胞原代培养	裸鼠成瘤
凋亡因子芯片		基因编辑动物
趋化因子芯片	电生理相关服务	动物整体实验服务
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片	膜片钳实验
细胞生物学	高通量测序	代谢组学
细胞原代培养	mRNA测序	气相色谱GC/MS
MTT检测	LncRNA测序	液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测	全基因组测序	核磁共震NMR
细胞周期检测	RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验	外显子测序	影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭	16s扩增子测序	Micro-CT
流式分选	Small RNA测序	小动物活体成像
CCK8/XTT检测	宏基因组测序	核磁共振
台盼蓝检测细胞活性	单细胞测序	PET-CT
药物筛选细胞学实验	circleRNA测序
细胞粘附性检测	甲基化测序	基因编辑动物
细胞划痕实验		条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验		全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验
病理类	CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入	基因芯片
扫描电镜	基因定点突变细胞系	LncRNA芯片
透射电镜	单基因敲除细胞系	miRNA芯片
HE染色	多基因敲除细胞系	mRNA芯片
免疫组化	目的基因敲入细胞系	甲基化芯片（限人和小鼠来源样本）
Tunel（原位末端凋亡法）检测	报告基因敲入细胞系	SNP芯片（限人和小鼠来源样本）
激光共聚焦	miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光
Masson染色	CRISPR/Cas9动物敲除/敲入	科研方案设计与SCI相关服务
原位杂交	基因敲除大鼠/小鼠	科研文献论著翻译
荧光原位杂交	基因敲入大鼠/小鼠	SCI论文翻译润色服务
特殊染色（PSA、茜素红、阿尔新蓝等）		临床实验/科研实验设计方案指导
行为学检测	药物筛选服务项目	药效学评价
水迷宫实验	高通量自动药物筛选平台	神经系统药物药效学评价
旷场实验	细胞高内涵药物筛选平台	抗肿瘤药物药效学评价
重复性刻板行为检测	蛋白质组学靶标研发平台	心血管系统药物药效学评价
动物跑台检测	分子药理研究平台	泌尿系统药物药效学评价
强迫游泳	生物膜片钳药物筛选平台	内分泌系统药物药效学评价
	常规药物体外筛选	抗炎免疫药物药效学评价

【本平台合作项目】
分子生物学、细胞生物学、基因敲出/入、模式动物、SPF动物保种、病理学检测、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！