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文献和实验
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保存条件 ：0-5度
保质期 ：一年
英文名 ：Cell Counting Kit-8 (CCK-8)
库存 ：大量
供应商 ：上海觅拓生物科技有限公司
规格 ：500T
产品介绍：
Cell Counting Kit-8(CCK-8)是由同仁化学研究所(Dojindo Laboratories)开发的检测细胞增殖／毒性的试剂盒，为MTT法的替代方法。试剂盒中采用同仁化学研究所开发的水溶性四唑盐(WST-8)，在美国、欧洲等国家地区均持有专利，同仁化学研究所于2006年在中国获得了WST的注册商标。
CCK-8在国内知名科研院所、重点大学、三甲医院被广泛应用，国际认可度高，使用CCK-8发表的中外文献达600多篇，其中截止08年底SCI影响因子IF＞10分的论文有37篇，最高IF38.5分。
2015年版中国药典第三部363页收载了新药：尼妥珠单抗(Nimotuzumab)注射液，是全球第一个以表皮生长因子受体(EGFR)为靶点的单抗药物，也是中国治疗恶性肿瘤的人源化单克隆抗体（商品名：泰欣生，生产商：百泰药业）。该药的生物学活性测定方法采用H292细胞（人肺癌淋巴结转移细胞）增殖抑制法（通则138页），使用了同仁化学研究所的CCK-8。这是CCK-8检测方法首次被中国药典收载，表明该方法已经获得国家权威机构认可。
试剂包装：500T ：5ml /瓶
试剂测定原理：
CCK-8试剂检测细胞活力，可用于细胞增殖和毒性分析，方法简便而准确。其基本原理为：该试剂中的WST-8与MTT类似，在电子载体1-甲氧基PMS的作用下，被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲臜染料(Formazan),甲臜的生成量与活细胞的数量和活力成正比，因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
试剂的优点：
CCK-8法与普通的MTT法相比，具有显著特点：
★灵敏度高，数据可靠，重现性好
★操作简便，省时省力
★水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞
★无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低
★为1瓶溶液，毋需预制，即开即用
★适合于高通量药物筛选
CCK-8用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验
注意事项：
贴壁细胞每孔至少需要接种1,000个细胞 (100 μl的培养基)，检测白细胞时由于它的灵敏度较低，每孔至少需要接种2,500 个细胞 (100 μl的培养基)，建议先做几个孔摸索接种细胞的数量。如果要使用24孔板或是6孔板实验，请先计算每孔相应 的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK- 8溶液。
2. 如何设定空白对照？
在不含细胞的培养基中加入CCK- 8，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验 (细胞毒性实验) 时，还应考虑药 物的吸收，可在不含细胞，加入药物的培养基中加入CCK- 8，测定450 nm的吸光度作为空白对照。
3. 哪些物质会影响CCK- 8的测定？
当有还原性物质存在时会影响CCK- 8的测定，增加O.D值；在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生，减小O.D值； 在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。
4. 在做加药实验时，药物对测定是否有影响？如何解决？
有时会有影响。如果药物具有还原性，就会和CCK- 8试剂发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否 有吸收，在含有药物的培养基中加入CCK- 8，测定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (只加CCK-8) 的吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK- 8之前更换培养基，去掉药物的影响。
5. CCK- 8对细胞的毒性大小如何？
CCK- 8对细胞的毒性相当低，同样的细胞在CCK- 8法检测后还可用于其他细胞增殖的检测实验，如结晶紫检测法，中性 红检测法或DNA荧光检测法等。
6. CCK- 8的保质期有多久？
CCK- 8在避光0-5℃的条件下可以存放1年，在-20℃下避光可以保存2年。如果需要长期保存，我们推荐在-20℃储藏。 在常温下可以保存3周左右，颜色应该为浅红色，如果颜色发生改变，则可能会增加空白吸光度。
7. 我没有450 nm的滤光片，还可以使用哪些其他的滤光片？
您可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。
8. CCK- 8能否对活细胞进行染色?
不能。因为CCK- 8的主要成分是一种水溶性的四唑盐 (WST®- 8)，并通过电子载体1- Methoxy PMS将活细胞中的电子交 换到培养基中的WST®- 8上，因为WST®- 8及其生成的甲臜染料是高度水溶性的，不会进入细胞内，所以CCK- 8不能对 活细胞进行染色。
9. 必须设定参比波长吗？设定的目的是什么？
不一定要设定，CCK- 8试剂在参比波长处没有吸光度。设定参比波长的目的是为了去除由于样品浑浊所带来的吸收。
10. 如果O.D值太低，可以采取什么办法？ 可以采取2个办法：
② 延长加入CCK- 8试剂后的染色时间。
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