CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型

服务名称 ：CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型

提供商 ：武汉云克隆诊断试剂研究所

规格 ：询价

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CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型

肝纤维化是指肝脏内弥漫性细胞外基质（特别是胶原）过度沉积，不是一个独立的疾病，是许多慢性肝病共同的病理过程，几乎各种慢性肝病（化学毒性、感染性、遗传代谢性、自身免疫性，以及胆汁淤积性）都可以导致肝纤维化。
CCl4是诱导实验动物产生肝纤维化和肝硬化最广泛使用的化学性肝毒物。在肝细胞内质网中，经肝微粒体内依赖于细胞色素P450 的具有混合功能的氧化酶激活后，CCl4产生了自由CCl3·及Cl，它们与肝细胞内大分子发生共价结合， 可攻击膜不饱和脂质，引发活性氧自由基的产生和脂质过氧化，损伤肝细胞，从而导致狄氏间隙内原本静止的贮脂细胞活化，释放出Ⅳ型胶原酶，降解Ⅳ型胶原。同时该细胞由合成分泌Ⅲ型胶原改为合成分泌I 型胶原，取代了Ⅳ型胶原，促使肝脏纤维化

1.实验动物
SPF级BablC小鼠，健康，雄性，体重为18g-20g。

2.实验分组
实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。

3.实验周期
6W

4.主要试剂
CCl4（上海国药集团）

5.建模方法
按5ml/kg 体重皮下注射体积分数为20% CCl4的油剂溶液（CCl4：橄榄油=1:4）, 每3天1次，连续6W。对照组动物皮下注射等量等次的橄榄油溶剂。正常饮食饲养，观察动物活动、精神状况和饮食量,实验前后称量小鼠体重。
完成持续给药6W后，称体重，戊巴比X妥钠腹腔注射麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置2h后于4℃ 3000r离心10分钟提取血清，放入-80℃ 冰箱冻存。同时取肝左叶组织1.5cm×1cm×0.2cm于10%中性福尔马林中固定，石蜡包埋；其余肝组织液氮冷冻-80℃ 保存。

6.模型评价
1.大体观察： CCl4组小鼠随着给药时间延长活动逐渐减少, 精神萎糜,毛发蓬乱无光泽；大体标本显示，CCl4组肝脏与周围组织粘连明显，肝边缘圆顿，肝脏表面和切面呈弥漫的细小结节。
2.肝脏指数变化：取肝脏，称质量，计算肝脏指数=肝脏重/体重， CCl4组小鼠肝脏显著高于对照组小鼠。
3.肝功能指标：
检测小鼠血清中肝功能指标：丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素（TBL）、白蛋白（ALB）。结果发现 CCl4组小鼠血清中ALT、AST、TBL的含量显著高于对照组，ALB的含量显著低于对照组。
4.肝脏病理变化
取肝左叶，体积分数为10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，经HE及 Masson 染色后在电镜下观察肝脏炎症及肝纤维化程度。
按下述标准评判肝纤维化程度：
肝炎病变依炎症活动度分为 4 级：
“−”汇管区周围及肝小叶内无炎症；
“+”肝细胞变性范围不超过肝小叶半径的1/2，汇管区有炎症，小叶内少数肝细胞变性或呈点状坏死；
“++” 肝细胞变性范围超过肝小叶半径 1/2，汇管区大量炎症细胞浸润，较多肝细胞变性，呈碎片状坏死；
“+++”肝细胞变性范围超过肝小叶半径的 2/3，汇管区周围重度碎屑坏死，肝细胞以碎片状和桥接状坏死为主。
肝纤维化按情况严重程度分为以下 4 级：
“−”无肝纤维化现象；
“+”汇管区胶原纤维增多，但无纤维间隔形成；
“++”汇管区周围形成彼此不连接的不完全性纤维间隔；
“+++”小叶结构紊乱，纤维间隔明显，分割肝实质。
5.细胞因子的变化：
肝脏损伤后，血清中TNFα、IFNγ、IL-2、IL-6、ICAM1等细胞因子的表达显著升高，可以用ELISA法检测。

图1 肝脏大体图 大体标本显示，Oil组肝脏正常， CCl4组肝边缘圆顿，质地硬，肝脏表面和切面呈弥漫的细小结节

表1 2组小鼠肝脏指数的比较（n=7 `x ±ｓ）
组别 对照组 模型组
肝脏/体重比 0.073±0.008 0.046±0.004*
注：与对照组相比，*P<0.05

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