亲和纯化/质谱（Affinity purification，AP/MS）

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服务名称：亲和纯化/质谱

提供商：辉骏生物

实验目的：寻找靶蛋白的互作蛋白

亲和纯化/质谱服务简介—辉骏生物：
与常规Co-IP实验非常类似，只是亲和纯化法不需要引入抗体。将标签（如SBP）与特定基因融合表达，得到的融合蛋白可以采用链霉亲和素（strep）磁珠来亲和纯化，用生物素洗脱，最终得到蛋白复合物。
实验组和对照组的洗脱蛋白分别做质谱，再从实验组结果中扣除对照组中的蛋白，即可得到与靶蛋白互作的蛋白。

AP/MS技术优势—辉骏生物：
1、AP/MS得到的互作蛋白是在细胞内与诱饵蛋白结合的，符合体内真实生理情况，得到的结果可信度高。
2、不像COIP采用抗体拉取蛋白复合物，可以有效的避免抗体的污染；得到的洗脱液可以直接做溶液酶解和质谱，大大减少了跑胶引起的蛋白损失。

AP/MS服务内容—辉骏生物:
1.构建带SBP标签的靶基因表达载体；
2.质粒转染目的细胞，细胞裂解液用strep-HRP做WB检测表达效果（瞬时转染不受基因大小限制，但是受细胞转染率高低的影响；因此难转染细胞可能不适合于该方法，需要进行其他基因导入方法，如慢病毒或腺病毒等）；
3.用strep磁珠进行蛋白复合物的纯化和洗脱；
4.实验组和对照组的洗脱液分别用胰酶酶解，获得2组多肽混合物；
5.2组多肽混合物分别做LC-MS/MS，获得蛋白质的定性信息；
6.实验组结果中扣除对照组中的蛋白，即可得到与靶蛋白互作的蛋白。

AP/MS技术流程图—辉骏生物：

服务项目	客户提供	交付产物	实验周期
AP/MS	1、诱饵基因的名称、序列、物种等相关信息或者诱饵基因的克隆模板 2、待研究的细胞（保证细胞状态良好，易于用质粒转染）	1、构建好的真核表达载体 2、实验组和对照组蛋白的质谱鉴定结果 3、数据分析结果	2-2.5个月