藻类RNA柱式提取试剂盒

保存条件 ：2～8℃

保质期 ：一年

英文名 ：Column Algal RNAOUT

库存 ：665

供应商 ：北京百奥莱博科技有限公司

规格 ：50次

本试剂盒是专门用于各种藻类样品RNA提取的产品。

试剂盒特点：

• 操作简单快捷，整个过程只需要约30分钟。


• RNA纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Northern杂交、microarray hybridization、cDNA合成等。


• RNA产量高，一般在20～70μg/mL液体藻类培养物(约2.0×10⁷个细胞)。


• 非酶细胞破裂法，适用于各种形态的藻类和各个种属的藻类。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50mL
溶液B	50mL
溶液C	100mL
溶液D	30mL
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	100mL
RNA洗脱液	10mL
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

• 将1～5mL液体藻类培养物在1.5mL塑料离心管中5000～7000rpm 4℃离心1分钟，并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。


• 加入0.5mL溶液A并充分吹打混匀。
  注意：溶液A存放时容易产生沉淀，如果有沉淀，用前请置于65℃融化并充分摇晃均匀。


• 加入0.5mL溶液B，剧烈振荡30秒。


• 65℃保温5分钟。注意：不要超过5分钟，否则RNA容易降解。


• 5000～7000rpm 4℃离心3～5分钟，转移上清到一自备的、干净的1.5mL塑料离心管中。


• 在上清液中加入0.2mL自备的氯仿，充分振荡30秒混匀。


• 4℃ 5000～7000rpm离心3～5分钟，转移上清液到一自备的、干净的5～10mL塑料离心管中。


• 加入相当于上清液(约1mL左右)3倍体积的溶液C和1倍体积的溶液D，充分混匀。如果上清为1mL，则加入3mL溶液C和1mL溶液D。


• 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次转移0.7mL混合液到离心吸附柱中，室温放置2～3分钟以让RNA跟吸附膜充分结合，然后5000～7000rpm室温离心30～60秒，弃收集管中的穿透液，然后再加入0.7mL混合液，重复上面的操作，直到混合液全部挂柱。


• 第一次洗涤：将0.7mL通用洗柱液加到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。


• 第二次洗涤：一次洗涤一般足够去除杂质，但如果样品OD260/280比值不高，可以再用0.3mL通用洗柱液重复上步洗涤一次。


• 室温离心空柱子(带收集管)半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。


• 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5mL塑料离心管中，加入30～100μL RNA洗脱液。具体加多少根据RNA浓度决定，建议先使用小体积洗脱液，这样浓度过高还可以稀释。


• 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。


• RNA完整性的电泳检测：
  注意：普通DNA上样液不含变性剂，更没经过去RNase处理，所以最好不要用于RNA电泳。


• RNA产量和纯度产率测定：
  将5～10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5～8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE(pH7.5～8.2之间)中测得的低10%～15%；也不要稀释过度，使OD读数在仪器的有效范围之外，这样得到的OD比值没有意义。