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文献支持细胞染色质免疫共沉淀（ChIP）试剂盒-20T
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促销： 买就送PCR纯化试剂盒
备注： 现货顺丰包邮，开票
产品详情
文献和实验
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保存条件 ：-20℃及4℃
规格 ：20T
万类生物试剂促销：试剂盒8折优惠，细胞染色质免疫共沉淀（ChIP）-20T 原价2135元，现价1708元。
产品名称：细胞染色质免疫共沉淀（ChIP）试剂盒
产品概述：染色质免疫沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay, ChIP）作为最佳的研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法，它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。
注意事项：
1. 甲醛固定时，时间不宜过长，10min即可。
2. 超声时温度不能过高，最好冰浴进行；防止样品起沫。
3. 样品中加入填料后离心转数不能过大，防止填料破碎。
4. 蛋白酶抑制剂使用前室温融化。
该产品被引用文献（仅展示部分）：
1、 Pan M; Luo M; Liu L, et al., EGR1 suppresses HCC growth and aerobic glycolysis by transcriptionally downregulating PFKL. J Exp Clin Cancer Res 2024, 43 (1), 35.
IF: 11.3 Year: 2024 PMID：38287371
2、 Zhang W; Wang Q; Xing X, et al., The antagonistic effects and mechanisms of microRNA-26a action in hypertensive vascular remodelling. Br J Pharmacol 2021, 178 (5), 1037-1054.
IF: 7.73 Year: 2020 PMID：33305374
3、 Zhang X; Liu L; Liu X, et al., Chidamide suppresses adipogenic differentiation of bone marrow derived mesenchymal stem cells via increasing REEP2 expression. iScience 2023, 26 (3), 106221.
IF: 6.107 Year: 2023 PMID：36879811
操作流程：
1. 每皿细胞（9ml 培养液），加入243µl 37%甲醛，使得甲醛的终浓度为1%，室温培养10min。
2. 终止交联：加1M 甘氨酸1.26ml，使其终浓度为0.125M，室温培养5min。
3. 吸尽培养基，用预冷的PBS洗两次后，加适量蛋白酶抑制剂（2ml PBS中加入5µl 蛋白酶抑制剂），用细胞刮收集细胞，2000rpm，4℃离心5min。
4. 弃上清，加入1ml Buffer A，冰上放置10min，3000-5000rpm离心5min。
5. 弃上清，加入400µl Buffer B（每100µl Buffer B中含有106细胞）重悬后加入5µl 蛋白酶抑制剂。
6. 超声破碎。一般来说，300W超声10s，间隔30s，12次。12000rpm，4℃离心20min。取20µl上清电泳检测，抹带集中在500-1000bp左右即可。
7. 样品分成三组，每组100µl，A：实验组； B：阳性对照组；C：阴性对照组，剩余样品可放置-80℃保存。
8. 在三组样品中分别加入900µl Chip Diluiton Buffer。
9. 准备ProteinA beads，用1ml PBS 清洗三次（3000rpm离心1min）后保存备用，此步可提前准备。
10. 三组样品中各加入60 µl ProteinA beads， 4℃颠倒混匀1-2h。
11. 混匀后4℃静置10min，3000rpm离心1min。
12. 取上清，每组样品取20µl 进行 Input实验，-20℃保存。
13. 实验组中加入1-10µg 抗体；阳性对照组加入1µg RNA Polymerase II抗体；阴性对照组加入1µg 正常血清IgG，4℃过夜孵育。
14. 三组样品中再加入60µl ProteinA beads， 4℃颠倒混匀1-2h。
15. 洗涤ProteinA beads 依次用下列溶液清洗沉淀复合物。清洗步骤为：加入1ml 预冷溶液，在4℃混匀10min，3000rpm离心1min，除去上清。
a. Low Salt Wash Buffer，1次。
b. High Salt Wash Buffer，1次。
c. LiCl Wash Buffer，1次。
d. TE Buffer，2次。
16. 每管加入100µl Elution Buffer（100µl 10%SDS+100µl 1M NaHCO3+800µl ddH2O），室温颠转10min后3000rpm离心1min，收集上清。重复洗脱1次，终体积200µl。
17. 取出Input实验样品，室温融化后加入180µl Elution Buffer。
18. 解交联。每管中加入8µl 5M NaCl，混匀，65℃解交联过夜。
19. 解交联结束后，每管加入1µl RNaseA，37℃孵育1h。
20. 每管加入4µl 0.5M EDTA，8µl 1M Tris-HCl（PH=6.5），1µl Proteinase K，45℃孵育2h。
21. DNA片段回收（WLA092a PCR纯化试剂盒）。
22. 对照品的PCR。
23. 取出每种PCR反应物10μl，采用4%琼脂糖凝胶电泳（采用100bp DNA marker）进行分析。
2. 终止交联：加1M 甘氨酸1.26ml，使其终浓度为0.125M，室温培养5min。
3. 吸尽培养基，用预冷的PBS洗两次后，加适量蛋白酶抑制剂（2ml PBS中加入5µl 蛋白酶抑制剂），用细胞刮收集细胞，2000rpm，4℃离心5min。
4. 弃上清，加入1ml Buffer A，冰上放置10min，3000-5000rpm离心5min。
5. 弃上清，加入400µl Buffer B（每100µl Buffer B中含有106细胞）重悬后加入5µl 蛋白酶抑制剂。
6. 超声破碎。一般来说，300W超声10s，间隔30s，12次。12000rpm，4℃离心20min。取20µl上清电泳检测，抹带集中在500-1000bp左右即可。
7. 样品分成三组，每组100µl，A：实验组； B：阳性对照组；C：阴性对照组，剩余样品可放置-80℃保存。
8. 在三组样品中分别加入900µl Chip Diluiton Buffer。
9. 准备ProteinA beads，用1ml PBS 清洗三次（3000rpm离心1min）后保存备用，此步可提前准备。
10. 三组样品中各加入60 µl ProteinA beads， 4℃颠倒混匀1-2h。
11. 混匀后4℃静置10min，3000rpm离心1min。
12. 取上清，每组样品取20µl 进行 Input实验，-20℃保存。
13. 实验组中加入1-10µg 抗体；阳性对照组加入1µg RNA Polymerase II抗体；阴性对照组加入1µg 正常血清IgG，4℃过夜孵育。
14. 三组样品中再加入60µl ProteinA beads， 4℃颠倒混匀1-2h。
15. 洗涤ProteinA beads 依次用下列溶液清洗沉淀复合物。清洗步骤为：加入1ml 预冷溶液，在4℃混匀10min，3000rpm离心1min，除去上清。
a. Low Salt Wash Buffer，1次。
b. High Salt Wash Buffer，1次。
c. LiCl Wash Buffer，1次。
d. TE Buffer，2次。
16. 每管加入100µl Elution Buffer（100µl 10%SDS+100µl 1M NaHCO3+800µl ddH2O），室温颠转10min后3000rpm离心1min，收集上清。重复洗脱1次，终体积200µl。
17. 取出Input实验样品，室温融化后加入180µl Elution Buffer。
18. 解交联。每管中加入8µl 5M NaCl，混匀，65℃解交联过夜。
19. 解交联结束后，每管加入1µl RNaseA，37℃孵育1h。
20. 每管加入4µl 0.5M EDTA，8µl 1M Tris-HCl（PH=6.5），1µl Proteinase K，45℃孵育2h。
21. DNA片段回收（WLA092a PCR纯化试剂盒）。
22. 对照品的PCR。
23. 取出每种PCR反应物10μl，采用4%琼脂糖凝胶电泳（采用100bp DNA marker）进行分析。
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