iTRAQ/TMT定量蛋白质组学技术

服务名称 ：iTRAQ/TMT定量蛋白质组学技术

iTRAQ/TMT定量蛋白质组学技术
iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技术是生物学领域应用广泛的两种蛋白质标记定量技术。该技术分别通过与多肽氨基末端以及赖氨酸残基伯氨基结合，实现对多肽的标记。在质谱分析时，不同样本的同一肽段标记后表现为相同的质荷比，被同时选择进行二级碎裂，产生质量不同的报告离子，通过报告离子的丰度实现不同样品间蛋白质的定量。

应用领域：
适用于不同样本的蛋白质组定量研究。

技术优点：
1.适用于各种动植物组织/细胞、微生物、体液样品分析
2.一次实验同时对多达2-10个样本进行定量分析
3.一次实验可获得高通量的定量数据

采用仪器：

iTRAQ/TMT技术流程：
样本经过不同处理后提取蛋白质，蛋白质经过还原，封闭后蛋白酶酶切（通常为trypsin），肽段混合物分别用不同的iTRAQ/TMT试剂标记，等量混合各种iTRAQ/TMT试剂标记的肽段， MS/MS质谱检测及分析。

数据分析内容：
1.数据库鉴定数据统计
2.蛋白质/肽段鉴定及定量结果
3.差异蛋白质统计分析
4.蛋白质Pathway代谢通路分析
及差异蛋白的Pathway富集分析
5.多样品间分类统计、功能富集、
聚类分析（适用于样本数≥3的项目）

样品要求:
蛋白提取物：≥100ug
细胞：≥107
组织：动物组织≥100mg,植物组织≥10mg
体液：血清/血浆≥500μL，尿液≥25mL，唾液、脑脊液等体液≥5ml
其他样本如有疑问请联系我们


参考文献：
1 Richard, D. U.et.al. Simultaneous analysis of relative protein expression levels across multiple
samples using iTRAQ isobaric tags with 2D nano LC–MS/MS.Nature Protocols 5,1574-1582(2010).
2 Josselin Noirel1. Methods in Quantitative Proteomics: Setting iTRAQ on the Right Track. Current Proteomics 2011, 8, 17-30.
3 Elias, J. E., Gygi, S. P. Target-decoy search strategy for increased confidence in large-scale
protein identifications by mass spectrometry. Nat Methods 2007, 4(3):207–214.
4 Altelaar A.F., et al. Benchmarking stable isotope labeling based quantitative proteomics. J Proteomics Oct 22. pii: S1874-3919(12)00704-X. doi: 10.1016/j.jprot.2012.10.009.
5 Zhang, T., et al. (2010). Improving quantitation of TMT-labeled peptides using stepped higher-energy collisional dissociation. Application note # 483www.thermoscientific.com
6 顾培明,李静. 应用Orbitrap Fusion对TMT标记样本进行MS2定量方法及SPS MS3定量方法的比较.塞默飞世尔（中国）有限公司.Application Notes CM0098.

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