DpnI

库存 ：大量

Reaction conditions

Recommended buffer for 100% activity	Optimal temperature	Enzyme activity in Fermentas buffers, %						Tango™ buffer for double digestion
		B (blue) 1X	G (green) 1X	O (orange) 1X	R (red) 1X	Tango™ (yellow) 1X / 2X
Tango™	37°C	100	100	50-100	50-100	100	50-100	1X or 2X

pBR322 DNA
1.4%琼脂糖
22 切割位点

100%酶活性的反应条件

1X 缓冲液Tango™：
33 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。

保存缓冲液

DpnI保存在：
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 400 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50%�v/v)甘油。

连接和重新酶切

50倍DpnI过量酶切后，超过70%的pBR322 DNA酶切产物可以连接，95%的连接产物能重新酶切。

备注

• DpnI切割DNA时要求识别序列内部存在修饰碱基N6-methyladenine。
• DpnI酶切底物是从dam+菌株中纯化的DNA。
• DpnI只能切割腺嘌呤全部甲基化或半甲基化的dam位点。半甲基化dam位点的切割速度慢60倍。
• DpnI、Bsp143I和MboI识别的核苷酸序列相同，但是这些酶的甲基化敏感性不同和切割位置不同。
• 底物为pBR322 DNA。

商业化同裂酶

采用REsearch™软件寻找同功酶。

双酶切

采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

甲基化影响

Dam: 不能切割 dam- DNA。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。

Methylation type	Sequence	Cleavage effect
CpG	5'...Gm6A Tm5C G...3' 3'...C Tm6A Gm5C...5'
Dam (GATC)	Gm6ATC

Cleavage efficiency close to the termini of PCR fragments

bp from the recognition site to fragment end
1	2	3	4	5
50-100

Number of recognition sites in DNA molecules

Lambda	ΦX174	M13mp18/19	pBR322	puc18/19	pUC57
116	0	7	22	15	15
pTZ19R/U	pTZ57R	pBluescriptIIKS(-/+)	pBluescriptIISK(-/+)	pACYC177	pACYC184
15	15	15	15	22	15