Exonuclease I (Exo I)

库存 ：大量

Features

• 在Fermentas公司的PCR缓冲液中有活性。

Applications

• 除去PCR混合物中引物，应用如下：
  一 测序(2)，见操作方法;
  一 同试管内"大引物"PCR突变(3)。
• 从核酸混合物中去除含有3’-羟基末端的单链DNA。
• 分析是否含存在有3’-羟基末端的单链DNA (4)。

说明

Exonuclease I (ExoI)按3’=>5’方向降解单链DNA，逐步释放脱氧核糖核苷5’-单磷酸并保留完整的5’-末端的二核苷酸，见图1。该酶不能切割末端3’-OH基团被磷酰基或乙酰基封闭的DNA链(1)。

来源

含大肠杆菌sbcB克隆基因的大肠杆菌。

分子量

54.5 kDa，单体。

活性单位定义

1个活性单位是指在37°C、30分钟催化释放10 nmol酸性可溶性核苷酸所需的酶量。

酶活性分析混合物：67 mM glycine-KOH (pH 9.5), 6.7 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 0.17 mg/ml单链[³H]-DNA。

保存缓冲液

保存缓冲液组分：
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT和50% (v/v)甘油。

10X 反应缓冲液

670 mM glycine-KOH (pH 9.5, 25°C), 67 mM MgCl₂, 10 mM DTT。

质量控制

相关测试表明无内切或双链外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染。

抑制与失活

• 抑制剂： 20% (w/v) PEG 8000 (5)。
• 失活：80°C加热15分钟。

备注

该酶不适合除去dsDNA的3’-突出末端。

图1。Exonuclease I 活性。