Endonuclease V, (Endo V)

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Features

• 最适合的反应温度为65-70°C

Applications

• 高通量突变研究方法(3, 4)。
• 突变和DNA修复研究。
• 错配切割。
• 基因分型。

说明

Endonuclease V, T.maritima (Endo V)是一种参与DNA修复的3’-内切核酸酶，从损伤的DNA中除去脱氨基碱基，包括尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤，见图1。

Endonuclease V对含有脱碱基位点、尿素位点、碱基对错配、分叉和类似Y型结构、小型插入/缺失的DNA分子有活性，切割损伤位点3’端第二个磷酸二酯键。酶过量时，该酶在原有缺口产物的互补链上产生新切口，从而使双链断裂。低浓度时，Endonuclease V优先切割靠近DNA链5’-端的损伤位置。单链DNA的切割效率很低。Mg²⁺或Mn²⁺离子对该酶活性至关重要(1, 2, 3)。

来源

大肠杆菌，含有海栖热孢菌(Thermotoga maritima)来源的克隆基因nfi。

分子量

25 kDa，单体。

活性单位定义

1个活性单位是指在65°C、30分钟内改变1 μμg脱嘌呤的超螺旋质粒DNA拓扑结构状态所需的酶量。

酶活性分析混合物：25 mM HEPES-NaOH (pH 7.4), 5 mM MgCl₂, 5 mM DTT, 2% (v/v)甘油, 2 µg部分脱嘌呤的pUC19 DNA。

保存缓冲液

保存缓冲液组分：
20 mM HEPES-NaOH (pH 7.4), 5 mM DTT, 50 mM NaCl, 0.1% (v/v) Triton X-100和50% (v/v)甘油。

10X 反应缓冲液

500 mM Tris-acetate (pH 7.5), 500 mM KCl, 10 mM EDTA, 0.5% (v/v) Triton X-100。

质量控制

相关测试表明无内切或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染。

抑制与失活

• 抑制剂：无特异性抑制剂。
• 失活：加入EDTA，沸水浴10分钟。

Notice

Use of this enzyme in certain applications may be covered by patents and may require a license.

图1。Endonuclease V, T.maritima 活性。