游离DNA提取试剂盒价格_品牌:lifefeng-丁香通官网

保存条件：室温

保质期：详见说明书

英文名：详见说明书

库存：大量

供应商：上海莱枫生物科技有限公司

CAS号：DK607

规格：DK607-01(50次)/DK607-S-50(50次)

产品简介
游离DNA(或称循环DNA，以下简称cfDNA)是一种无细胞状态的、片段化的胞外DNA，存在于血液、滑膜液和脑脊液等体液中，主要以为核小体的形式存在，片段长度主要为178 bp及其倍数。cfDNA在正常人的血液中含量甚微，平均值为13 ng/ml，而当机体在一些特殊状态时(如患有肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病、中风、心肌梗死及妊娠等)，其含量明显上升，比如恶性肿瘤患者平均值达到180ng/ml。
本方法适合处理的样品为血清、EDTA-K₂、EDTA-K₃或ACD抗凝的血浆，不适合处理肝素抗凝的血浆。
提供负压抽滤和离心过滤两种方式回收DNA：
DK607-01 (50次)：负压抽滤，最大处理体积为4 ml，轻松获得≥30 ng cfDNA。。
DK607-S-50 (50次)：离心过滤，每次处理200 μl样品，以孕妇血浆为例，可获得0.8-3.2 ng cfDNA。

血浆中肿瘤来源的DNA（ctDNA）含量低，甚至只占游离DNA(cfDNA)的0.01%。因此，高回收率与大体积处理能力成为cfDNA提取的关键。
游离DNA提取试剂盒(DK607-01)是针对cfDNA含量少、高度片段化的特点而设计，具备以下特点：
◆ 回收率约70-80%（见实验示例1）
◆ 负压抽滤，最大处理体积为4 ml，轻松获得≥30 ng cfDNA
◆ Buffer CFD1可作为样品保存液，方便分次采样和样品的异地运输
保存液能避免残留的细胞DNA进一步凋亡产生核小体单位DNA，减少了背景DNA干扰
◆ Buffer CFD1含DNA吸附基质，能有效去除细胞DNA
可通过自然沉降的方式分离血浆，DNA吸附基质能有效去除残留的细胞DNA（见图4）
去除细胞DNA有利于准确定量，并且能减少背景DNA干扰

cfDNA含量甚微，浓度低于Nanodrop等微量分光光度计和常规琼脂糖凝胶电泳检测下限，建议使用Qubit荧光计测定总DNA浓度，使用Agilent Bioanalyzer 2100电泳并测定区域DNA浓度。如存在大量细胞DNA，前者明显高于后者，两者的比例可作为判断能否进行后续实验的依据之一。
改进琼脂糖凝胶电泳方法可观察178 bp核小体单位DNA，同时能判断是否有细胞核染色体DNA残留。
产品使用说明书：游离DNA提取试剂盒
电泳详细方法：琼脂糖凝胶电泳鉴定游离DNA
更多产品信息请关注：www.lifefeng.com

实验示例1: 从1-5 ml血浆中提取DNA与估算回收率
样品准备：
血浆：使用EDTA-K₂采血管收集50 ml正常人血液，两次离心的方式获得约20 ml血浆。
245 bp DNA：根据Nanodrop定量稀释至0.5 ng/μl， 25 μl 245 bp DNA加入975 μl血浆中，总量约13 ng；
其浓度与和长度与正常人血浆中游离DNA相似，考察其回收率可间接估算游离DNA的提取效率。
实验数据：

样品	负压抽滤时间 (步骤六.6)	Qubit定量 (ng/μl)	DNA总量 (ng)
245 bp DNA		0.491	12.28
975 μl血浆加25 μl 245 bp DNA	2′ 12"	0.695	17.38
1 ml血浆	2′ 10"	0.317	7.93
2 ml血浆	4′ 52"	0.56	14
3 ml血浆	8′ 30"	0.89	22.25
4 ml血浆	12′ 12"	1.25	31.25
5 ml血浆	35′ 55"	1.7	42.5
洗脱体积： 25 μl

实验讨论1: 起始血浆体积与DNA产量可呈线性关系；
实验讨论2：处理5 ml血浆负压抽滤时间较长，DNA吸附柱已出现堵塞的情况，因此限定本方法处理血浆体积的上限为4 ml；
实验讨论3: 回收率=（外加DNA的血浆提取量 - 未加DNA的血浆提取量）/外加DNA的量=（17.38 - 7.93）/12.28 = 77%

Agilent Bioanalyzer 2100电泳鉴定1-5ml血浆中提取的DNA

Agilent Bioanalyzer 2100电泳鉴定回收率

↑ 图1: 245 bp DNA（Qubit定量0.491 ng/μl）
245 bp区域浓度为0.478 ng/μl，与Qubit定量接近
荧光值(FU): 85

↑ 图2：起始样品为975 μl血浆加25 μl 245 bp DNA
245 bp 区域浓度为0.466 ng/μl，可能是相邻峰干扰导致数值偏高
荧光值(FU): 61

根据荧光值(FU)估算回收率= 61/ 85 = 71.8%

琼脂糖凝胶电泳

←图3. 琼脂糖凝胶电泳
1.5% agarose, EB用电泳缓冲液稀释至1 mg/ml，在50 ml凝胶中加入1 μl
6.7V/cm 15 min；
M: DL2000+10kb，稀释10倍，电泳1 μl，750 bp约2 ng，其余条带约1 ng；
1-7电泳体积3 μl；
1：245 bp DNA片段；
2：起始样品为975 μl血浆加25 μl 245 bp DNA
3-7：起始血浆体积分别为1ml、2ml、3ml、4ml和5ml

琼脂糖凝胶电泳未观察到明显的细胞DNA残留，说明Qubit定量数据能相对准确反应游离DNA的量。

实验示例2: 考察Buffer CFD1去除细胞DNA