膜电位依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒

价格： ￥2720

品牌：国产

货号：YDJ902

产品详情

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O ^-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基
（hydroxyl radical；OH^-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯（6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetyl ester；CM－H2DCFDA）是取代二氯二氢荧光素二乙酯（2´,7´-dichlorodihydrofluorescin diacetate；DCFH-DA）的升级产品，一种完全自由通过细胞膜，并在细胞内长期滞留而不易外漏的染色剂。一旦被过氧化氢、羟自由基或氢氧基、过氧化基、次氯酸等氧化，便产生荧光。据此测定线粒体活性氧族的浓度。寡霉素（oligomycin）完全抑制III 态呼吸链。

产品内容

缓冲液（Reagent A）毫升
选择液（Reagent B）微升
补充液（Reagent C）毫升
染色液（Reagent D）微升
产品说明书 1 份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，染色液（Reagent D），严格避免光照；有效保证 12 月

用户自备

培养箱：用于染色孵育
（共聚焦）荧光显微镜：用于观察荧光线粒体荧光酶标仪：用于测定线粒体荧光强度

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂放进冰槽里融化，避免光照；同时从－80℃冰箱里取出待测的线粒体，放进冰槽里融化。然后进行下列操作。

准备 1 个 96 孔板，标记好背景对照孔和待测样品孔
分别加入 xx 微升 缓冲液（Reagent A）
分别加入 xx 微升 选择液（Reagent B）
移取 xx 微升线粒体悬液（总量为 50 微克线粒体蛋白）到 96 孔板的相应待测样品孔里
加入 xx 微升 补充液（Reagent C）到 96 孔板的相应背景对照孔里
分别加入 xx 微升 染色液（Reagent D）到上述孔里
放进 37℃恒温水槽孵育 15 分钟，避免光照
选择下列方式之一进行操作：
1. 使用（共聚焦）荧光显微镜观察（定性检测）： 1）移取 10 微升上述悬液到载波片上，盖上盖玻片2）激发波长 490nm，散发波长 530nm――

绿色荧光增强，表明活性氧族（ROS）含量高

1. 或使用荧光分光光度酶标仪检测（定量检测）：

1）直接放进荧光酶标仪：激发波长 490nm，散发波长 530nm――
样品RFU－对照RFU＝实际线粒体RFU：增高，表明活性氧族（ROS）含量高

注意事项

本产品为 20 次操作
操作时，须戴手套
孵育时，须避免光照
建议染色完成后，即刻进行荧光分析
本公司提供呼吸链依赖性活性氧检测试剂产品
本公司提供系列活性氧检测试剂产品

质量标准

本产品经鉴定性能稳定
本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

上海羽哚生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。