CRISPR/Cas9 转基因果蝇价格_品牌:-丁香通官网

服务名称：果蝇转基因技术服务

提供商：芳景生物

CRISPR/Cas9转基因

CRISPR/Cas9基因组编辑技术是一项能够实现靶向性地突变目标序列、对目标基因进行knockout、修饰以及定点knockin的重要技术，已被证明在酵母、线虫、果蝇、斑马鱼、小鼠、人类（细胞）等许多物种中都能发挥作用。CRISPR/Cas9以其设计操作简单、经济、高效的优点超越了传统的基因靶向技术和基因组编辑技术，成为科学界的新宠。

CRISPR/Cas系统是一种存在于大多数细菌和古细菌中的后天免疫系统，能够靶向性地切割外源DNA，从而抵御噬菌体或质粒的入侵。CRISPR全名“成簇、规律间隔短回文重复序列（Clustered regullarly interspaced short palindromic repeats）”，Cas是CRISPR相关蛋白的缩写（CRISPR-associated proteins）。CRISPR/Cas系统有3种类型，其中CRISPR I I型研究最为清楚，主要由Cas9核酸酶蛋白、crRNA（CRISPR RNA）及tracrRNA（trans-activating CRISPR RNA，反式作用CRISPR RNA，）组成。CRISPR II型系统发挥作用的过程可分为4个步骤（图1）：(1) crRNA和tracrRNA由CRISPR基因座转录出来；(2) tracrRNA结合pre-crRNA（前体crRNA）上的重复序列，并介导pre-crRNA被加工成为成熟crRNA；(3) 成熟crRNA-tracrRNA复合体结合Cas9，并将cas9引导至crRNA（通过Waston-Crick配对规则）所识别的目标区域；(4) Cas9对目标区域进行切割，形成DNA双链缺口（DSB，double-stranded break）。

图1 CRISPR/Cas9系统作用机制

整个过程的4个步骤可简单描述为转录-->加工-->识别-->切割

2012年，认识到CRISPR/Cas9系统在基因组编辑方向上的巨大潜力，Jinek等人将crRNA和tracrRNA序列经过改造整合成一个嵌合体RNA（single RNA chimera）——这种嵌合体分子后来也被称为single guide RNA（sgRNA）或guide RNA（gRNA）——并通过体外实验证明它能够取代crRNA:tracrRNA复合体，与Cas9蛋白相互作用并介导序列特异性的切割（图2）。从而将CRISPR/Cas9三元系统简化为二元系统，为进一步开发更为简单、通用的基因组编辑技术奠定了重要的基础。

图2 guideRNA的改造

2013年，几个不同实验室团队都发表文章报道，CRISPR/Cas9系统能被用来对果蝇基因组进行修饰——产生indel突变、大片段删除（gene knockout）以及同源重组介导的基因替换或插入（图3）。表达1个gRNA，能够引导Cas9切割基因组产生1个双链缺口，而非同源末端连接（NHEJ）的不精确修复，往往造成小片段的插入缺失（short indel and deletion，即indel），从而可能造成基因的移码突变或无义突变；若同时表达2个gRNA，并且在基因组上识别位点距离合适，能够通过Cas9切割产生2个双链缺口，最终造成大片段DNA的删除；另外，利用Cas9产生的双链缺口，引入带有缺口附近同源序列的模板，能够实现外源片段（基因或标记物等）的插入。