PhiC31定点插入转基因果蝇

服务名称 ：果蝇转基因技术服务

提供商 ：芳景生物

PhiC31位点特异性整合酶来源于PhiC31噬菌体，它能介导位于噬菌体自身环状基因组上的attP （attachment-P） 位点，与位于变铅青链霉菌（Streptomyces lividans）环状基因组上的attB （attachment-B）位点之间发生重组。利用这个原理，研究者最先在细菌、酵母、和哺乳动物细胞中实现了，在PhiC31整合酶的催化下将包含attB位点序列的质粒整合到包含attP位点（或称为docking site，锚定位点）的基因组上。2014年Groth等人首次证明利用PhiC31整合系统，在果蝇细胞或胚胎中也能高效地实现转基因。这对于果蝇转基因技术，无论在效率和应用范围方面都是一次重要的升级。PhiC31定点插入相对于P因子随机插入转基因技术具有几个优势：1. 可选择转基因插入的位置；2. 可以将更大的片段整合到果蝇基因组；3. Recombineering，改造后的系统更便于研究。 　　

果蝇中的PhiC31整合系统由3部分构成：(1) PhiC31整合酶；(2) attP果蝇品系；(3) 带有attB序列的注射质粒。PhiC31整合酶可通过注射外源PhiC31整合酶mRNA来提供，或者通过转基因将整合酶基因整合到果蝇基因组上，从而让胚胎自身表达提供整合酶。attP果蝇品系是通过转座子转基因技术（比如P因子， piggyBac， Mariner转座子），构建的带有attP位点的果蝇品系。attB质粒除了含attB位点，还被克隆上去了需要整合到基因组上的目的片段。这样，在PhiC31整合酶的催化下，注射质粒上的attB位点与基因组上的attP位点之间发生重组，从而将质粒上的序列完全整合到基因组上，并在序列两端形成新的杂合位点attL和attR（如下图），但attL与attR不能介导新的重组，因此PhiC31介导的转基因过程是不可逆的。 　　



　　目前，我们最常用的attP果蝇品系是attP2（BDSC# 25710）和attP40（BDSC# 25709），可以快速稳定高效地获得定点插入转基因果蝇。如果客户希望将目的片段整合到特定的attP品系，可以将果蝇寄给我们进行扩增然后进行注射。另外，我们免费提供balancer杂交及鉴定服务（我们有FM7a，Bc/Cyo，TM3/TM6b等balancer品系），如果客户需要与指定的品系进行杂交，可提前将果蝇寄给我们进行扩增。PhiC31定点插入转基因的服务内容及价格请参考下表：