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服务名称：ChIP(Chromatin immunoprecipitation)染色质免疫共沉淀

提供商：无锡菩禾生物医药技术有限公司

规格：1ml

ChIP(Chromatin immunoprecipitation)染色质免疫共沉淀
染色质免疫共沉淀技术主要应用于验证及探寻体内环境中，蛋白质和DNA的直接相互作用，旨在探索特定蛋白质在DNA上的特定结合序列，常在研究转录调控以及组蛋白修饰中被应用到。
实验过程大致为:交联解交联超声打碎兔疫沉淀洗涤-DNA纯化-PCR检测。

实验步骤
1.样品准备:培养细胞(若样品为组织,可先培养原代细胞);固定,或者直接活细胞送样。
2.细胞固定:此步骤目的为将结合在DNA上的蛋白用共价形式交联在所结合的位点上,避免在之后的操作步骤中脱离丢失。直接将甲醛加入细胞培养液,摇晃固定10分钟后,迅速加入2.5M甘氨酸解交联5分钟, PBS洗涤,刮下细胞。
3.超声打碎:此步骤目的为将长链的DNA打碎成200-1000bp的DNA片段。使用设备是超声水浴锅, EP管在冰水混合物中超声，超声后细胞悬液变得澄清透明。离心取上清。
4.免疫沉淀:此步骤是加入特异性抗体和对照lgG , 和结合抗体的磁珠(或proteinAG)。经稀释后,超声产物分成两份, 分别加入特异性抗体和对照lgG ,轮转过夜,第=二天加入磁珠轮转4小时。
5.洗涤:此步骤是减少非特异性结合。分别用稀释缓冲液、低盐溶液、高盐溶液、氯化锂溶液以及TE缓)冲液洗涤共7次。用洗脱缓)冲液在65*C洗脱过夜。
6.DNA纯化:将洗脱的产物用DNA纯化试剂盒纯化,得到50ul纯化产物,用于检测ChIP结果。

适用研究
1.筛选调控蛋白在基因组上的结合靶点:针对转录因子、DNARNA聚合酶、转录复合物等调控因子蛋白进行特异性的富集，分离纯化与之结合的靶DNA片段并测序，分析筛选到准确有效的靶位点、靶基因数据
2.揭示差异化表观遗传变异的原理:通过对不同表型组织内组蛋白、转录因子蛋白及其他结合蛋白进行染色质免疫共析，即可准确揭示差异化表观变异原理;
3.研究表观遗传变异疾病:借助染色质免疫共沉淀测序技术结合生物信息分析揭示由蛋白与DNA相互作用变异而引起的疾病的原理，明确表观遗传修饰在癌症等表观遗传变异疾病的发生发展过程中的具体作用机制。

结果展示

实验周期及交付标准
1.实验周期: 1-2周
2.交付标准:
①SDS-PAGE电泳结果;
②结果分析
③实验中的阳性对照和阴性对照结果;
④实验报告

收费标准：

菩禾生物所有服务项目：

细胞平台	行为学检测	动物模型
原代细胞制备与培养	水迷宫检测	慢性胰腺炎模型
细胞培养、传代	十字架	肝纤维化模型
原代细胞传代培养		非酒精性脂肪肝
细胞系STR鉴定服务	动物模型	骨质疏松模型
细胞转染	小/大鼠饲养	糖尿病模型
MTT细胞增殖、活性、毒性检测	小/大鼠灌胃	眼外伤模型
CCK8细胞增殖、活性、毒性检测	兔子饲养费	青光眼模型
流式细胞凋亡检测	大鼠灌胃	烧烫伤模型
流式细胞周期检测	小鼠灌胃	短肠模型
血管形成实验（非钙染/钙染）	兔子灌胃	肾衰模型
ROS检测	腹腔/肌肉给药（大小鼠）	肾炎模型
划痕实验	腹腔/肌肉给药（兔子）	尿路结石
克隆形成实验	尿液/粪便采集	高氧/低氧损伤模型
粘附实验	血液采集
transwell实验（迁移）	TTC染色	病理平台
transwell实验（侵袭）	超声检测	组织包埋
贴壁/悬浮细胞转细胞株构建	血常规检测	冰冻/石蜡切片
耐药细胞株筛选构建	DR检测	HE染色
	骨组织切片	其他特殊染色
分子平台	microCT	全扫描拍照
载体构建	皮下瘤模型	扫描电镜
细胞/组织/血液RNA提取	移植瘤模型	透射电镜
mRNA/miRNA等引物设计	原位瘤模型	共聚焦拍照
RT-qPCR检测	心肌缺血再灌注模型
CHIP检测	门静脉高压动物模型
EMSA检测	高血压动物模型
双荧光素酶实验	心肌梗死动物模型
原位杂交	动脉粥样硬化动物模型
	脑缺血再灌注
免疫平台	肾性高血压模型
蛋白（核/膜/总）提取	主动脉弓狭窄模型
蛋白含量测定	脊髓损伤模型
Western Blot检测	背根神经节损伤模型
COIP	脑瘫模型
免疫组化/荧光	癫痫模型
	抑郁症模型
行为学检测	肾脏缺血再灌注模型
水迷宫检测	关节炎
十字架	肺气肿模型