基因转染利器—慢病毒包装

产品简介

慢病毒（Lentivirus）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷1型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点，因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。

整体实验流程

（一） 实验流程（1、2、3为并列步骤）

1. 慢病毒过表达质粒载体的构建 设计上下游特异性扩增引物，同时引入酶切位点，采用PCR技术(采用高保真KOD酶，3K内突变率为0%)从模板中（cDNA质粒或者文库）调取目的基因CDS区（coding sequence）连入T载体。将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。

2. 慢病毒干扰质粒载体的构建 合成siRNA对应的DNA颈环结构，退火后连入慢病毒干扰质粒载体。

3. miRNA载体构建从 Genomic 中调取基因相应的Mir 前体, 并在调取引物中引入酶切位点。

4. 慢病毒载体的包装与浓缩纯化 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒（两质粒包装系统），三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后6 h 更换为完全培养基，培养48和72h后，分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。

（二）流程图

提供产品

产品名称	病毒滴度	规格	赠送阴性对照病毒规格
过表达慢病毒	＞10^8 PFU/ml	1ml	1ml（＞10^8 PFU/ml）
干扰慢病毒	＞10^8 PFU/ml	1ml	1ml（＞10^8 PFU/ml）