![Hieff Trans悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂[可申请试用]](https://img1.dxycdn.com/2022/0128/604/0058572101656809253-14.jpg)
产品详情
文献和实验
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保存条件 ：2-8ºC保存,不可冷冻！
保质期 ：有效期1年
英文名 ：Hieff Trans Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent
库存 ：大量
供应商 ：翌圣生物科技(上海)股份有限公司
CAS号 ：点击查看
规格 ：0.5ml
产品描述
Hieff Trans® 悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂是一种阳离子脂质体转染试剂，经优化专门用于悬浮细胞的转染，且适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。
Hieff Trans® 悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂以无菌的液体形式提供。
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。产品2-8ºC保存，一年有效。不可冷冻！
注意事项
1. 为得到良好的转染效率，请先用无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释Hieff Trans® Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent（以下简称Hieff Trans®），之后与DNA或RNA做混合。
2. 使用高质量的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，务必确保质粒的高纯度和无菌状态，彻底去除质粒提取过程中可能残留的苯酚和高盐，因为上述酚类会对细胞造成损失，而高盐分会干扰“Hieff Trans®-复合物”的形成。质粒中的内毒素也是转染的大敌，务必去除。
3. 转染时培养基中不能添加抗生素。
4. 阳离子脂质体应该在2-8℃保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。
5. 需优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。DNA和Hieff Trans®的比例，通常推荐是1:2 或1:3
推荐转染条件（以293悬浮培养细胞，质粒DNA转染为例）
最终转染体积：30 mL
转染细胞数目：3×107 cell（最终细胞密度：1×106 cell/mL），转染之前需要确保细胞健康，细胞活力>90%。
质粒DNA量：20–40 μg (typically use 30 μg)
转染试剂量：40–80 μL (typically use 60 μL). Use 2 μL Hieff Trans® per 1 μg of plasmid DNA transfected.
操作步骤（293悬浮细胞）
使用以下步骤在30 mL总体系内转染293细胞，转染过程中生长培养基内不要添加抗生素，否则会降低转染效率。转染过程请同时设置阳性对照组和阴性对照组（无DNA，无Hieff Trans®）。
【注】对于其他的培养总体系，按比例放大或者缩小各组分用量。
1. 转染当天，在配制复合物之前，准备转染需要的细胞量【见上推荐转染条件，即28 mL 生长培养基内加入3×107 cell，台盼蓝排斥法确定细胞活力和小量细胞成团量。剧烈漩涡混匀45 s以打破细胞团，并用计数器测定总细胞量。细胞活力需>90%。】【注】：为了达到良好效率，确保单细胞悬液。
2. 按照以下方法配制Hieff Trans®-DNA复合物，
a, 用无血清培养基（如OPTI-MEM I）稀释30 μg质粒DNA，使其终体积为1 mL；
b, 用无血清培养基（如OPTI-MEM I）稀释60 μL Hieff Trans®，使其终体积为1 mL；轻轻混匀，于室温孵育5 min；【注意】：过长时间孵育会降低效率。
c, 孵育5 min之后，将稀释的质粒DNA加入稀释的Hieff Trans®，使其总体积为2 mL。轻轻混匀。
d, 室温孵育20-30 min，使得DNA-Hieff Trans®复合物形成。此时溶液可能会混浊，但不会影响转染。
【注意】：DNA-脂质体复合物室温至少稳定保存5 h。
3. 孵育完全后，将2 mL DNA-Hieff Trans®复合物加入28mL 含293悬浮细胞的生长培养基内，使得细胞最终的密度约为1×106 cell/mL。对于阴性对照，用2 mL无血清培养基（如OPTI-MEM I）替换。
4. 37℃，8% CO2轨道摇床培养，转速125 rpm，直至进行转基因表达分析，无需去掉复合物或更换培养基。然而，可能有必要在4-6 h后更换生长培养基，不会降低转染活性。
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