文献支持Annexin V-Light 650 / PI细胞凋亡检测试剂盒-100T

保存条件 ：4℃及4℃避光

规格 ：100T

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产品名称：Annexin V-Light 650 / PI细胞凋亡检测试剂盒（试用装5T）

产品概述：
Annexin V是一种分子量为35kDa的Ca²⁺依赖性磷脂结合蛋白，能够特异性结合磷酯酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)。磷酯酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧，当细胞发生凋亡时，细胞会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面，即细胞膜外侧。DyeLight 650标记的Annexin V探针，即Annexin VLight 650，能够特异性的结合这些外翻的磷酯酰丝氨酸，通过流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到细胞发生凋亡的情况。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)，是一种核酸染料，它不能通过正常细胞膜，当细胞处于坏死或凋亡中晚期状态下，细胞丧失膜完整性，碘化丙啶进入细胞内部，与细胞核内的核酸发生结合，通过流式细胞仪或荧光显微镜检测，反映细胞膜完整状态的信息。故将Annexin V-Light 650与PI联合使用，将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

保存条件：4℃避光保存，六个月有效。如果长期不用，可以-20℃保存。

该产品被引用文献（仅展示部分）：
1、Yao X; Yang W; Ren Z, et al., Neuroprotective and Angiogenesis Effects of Levetiracetam Following Ischemic Stroke in Rats. Front Pharmacol 2021, 12, 638209.
PubMed: 34054520
2、Ni Y N; Kong L; Li X T, et al., Multifunctional osthole liposomes and brain targeting functionality with potential applications in a mouse model of Alzheimer's disease. J Liposome Res 2021, 31 (3), 267-278.
PubMed: 32757676
3、Ma Q; Li J; Zhou H, et al., The function of RNase L and its degradation mechanism in cardiac acute ischemic injury. Apoptosis 2020, 25 (5-6), 400-411.
PubMed: 32385693
4、Liu H; Li Z; Huo S, et al., Induction of G0/G1 phase arrest and apoptosis by CRISPR/Cas9-mediated knockout of CDK2 in A375 melanocytes. Mol Clin Oncol 2020, 12 (1), 9-14.
PubMed: 31832188
5、Cheng Y; Lu Y; Zhang D, et al., Metastatic cancer cells compensate for low energy supplies in hostile microenvironments with bioenergetic adaptation and metabolic reprogramming. Int J Oncol 2018, 53 (6), 2590-2604.
PubMed: 30280201

注意事项：
1.Annexin V-Light 650，Propidium Iodide（PI）需避光保存，其中Annexin V-Light 650长期不用（2个月以上）请分装后保存于-20℃， 避免反复冻融；
2.Propidium Iodide（PI）为有毒试剂，操作时需佩戴手套；
3.所有试剂使用前均需短暂离心，防止液体挂壁导致试剂量不足；
4.检测样品为贴壁细胞时，需去除残留胰酶，胰酶会酶解Annexin V导致染色失败；
5.由于检测细胞种类、诱导剂类型、仪器型号等差异，各试剂组份使用量可在推荐用量的基础上做适当优化，以取得更好的实验结果；
6.本试剂盒适用于检测细胞样本，不推荐用于组织样本的检测，固定后的样本不能用于检测；
7.流式细胞仪检测凋亡时，每次独立实验需制作未处理细胞Annexin V-Light 650单阳性管、Propidium Iodide单阳性管，用于荧光补偿调节。

操作流程：
对于流式细胞仪检测：

1.悬浮细胞直接离心（1500rpm，5min）收集；贴壁细胞用胰蛋白酶（可含EDTA）消化，消化时间不宜过长，加入完全培养基终止反应；
2.PBS漂洗细胞两次，并进行细胞计数，离心（1500rpm，5min）收集1-5×10 5个细胞；
3.加入500μl Binding buffer重悬细胞；
4.加入5μl Annexin V-Light 650混匀后，加入10μl Propidium Iodide混匀，室温避光反应5-15min；
5.请在1h内用流式细胞仪检测，Annexin V-Light 650荧光信号通过FL4通道检测，Propidium Iodide荧光信号通过FL2或FL3通道检测；
6.每次检测需要同时检测Annexin V-Light 650单阳性管、Propidium Iodide（PI）单阳性管，用于确定荧光补偿数值及十字象限门的位置。