LC-MSMS质谱鉴定价格_品牌:-丁香通官网

服务名称：LC-MSMS质谱鉴定

提供商：上海维基生物科技有限公司

规格：1H-4H

蛋白质全谱鉴定
Shotgun

1、技术简介

蛋白质（Protein）是生物体中含量最高，功能最重要的生物大分子，存在于所有生物细胞，作为生命的物质基础之一，蛋白质在催化生命体内各种反应进行、调节代谢、抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用，因此蛋白质也是生命科学中极为重要的研究对象。

现代研究结果发现越来越多的多肽同蛋白质一样具有生物功能，建立具有特殊、高效的生物功能肽的肽库是现在的研究热点之一。因此需要高效率、高灵敏度的肽和蛋白质序列测定方法支持这些研究的进行。现有的肽和蛋白质测序方法包括N末端序列测定的化学方法Edman法、C末端酶解方法、C末端化学降解法等，这些方法都存在一些缺陷。例如作为肽和蛋白质序列测定标准方法的N末端氨基酸苯异硫氰酸酯 PITC分析法，测序速度较慢，通量低；样品用量较大，对样品纯度要求很高；对于修饰氨基酸残基往往会错误识别等。C末端化学降解测序法则由于无法找到PITC这样理想的化学探针，其发展仍面临着很大的困难。在这种背景下，质谱（Mass spectrometer）由于很高的灵敏度、准确性、易操作性、快速性及较好的普适性而倍受科学家的广泛注意。

2、技术原理

蛋白质的一级结构式氨基酸序列，通过鉴定氨基酸序列来匹配它的蛋白质，这是定性研究，是蛋白质组学研究的基础。现在蛋白质组学基本研究手段是：以生物质谱技术为核心，对蛋白质进行大规模、高通量分离、鉴定和分析。以生物质谱为基础的蛋白质组学分析方法主要有Bottom-up（自下而上）和Top-down（自上而下）两种方法。Bottom-up是一种传统的方法，即我们俗称的“鸟枪法”蛋白质组学（Shotgun proteomics），该技术将蛋白质的大片段混合物酶解成小片段的肽段后再进行分析，是蛋白质组学的研究中较为广泛使用的一种质谱技术。Top-down技术可以直接对完整的蛋白质——包括翻译后修饰蛋白质（PTM）以及其他一些大片段蛋白质测序，但是由于不能将完整蛋白质片段分离技术与串联质谱技术相整合而无法开展大规模的蛋白质组学研究。

鸟枪法(Shotgun)蛋白质组学是基于质谱的蛋白质组学的典型实验策略。通常情况下，样品经过裂解液提取获得蛋白质混合物（Proteins），蛋白质经过酶解（一般为胰蛋白酶）而形成肽段（Peptides），肽段经高效液相色谱（HPLC，一般按照疏水性进行分离）之后进入质谱（Mass spectrometer）。肽段进入质谱后，先在离子源（Ion source）中进行电离，电离后的分子因接受了过多的能量会进一步碎裂成较小质量的多种碎片离子和中性粒子。它们在加速电场作用下获取具有相同能量的平均动能而进入质量分析器（Mass analyzer）。质量分析器是将同时进入其中的不同质量的离子，按质荷比离子依次进入离子检测器（Ion detector），采集放大离子信号，经计算机处理，绘制成质谱图（Mass spectrum）（图2）。最后将从质谱获得的数据通过分析软件与蛋白质数据库进行比对，获得原始样品中肽段和蛋白质的序列信息。