逆转录病毒载体构建

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逆转录病毒

逆转录病毒(Retrovirus)是一类单链RNA动物病毒。它的基因组含有2条相同的正链RNA分子,包装成二倍体病毒颗粒。除此之外,在其病毒颗粒内部还包含有tRNA引物分子、反转录酶、RNaseH和整合酶等组分。
逆转录病毒作为载体的特点
1、在大多数情况下,逆转录病毒的肿瘤基因都能够在正常的细胞中转录。它可以有效的整合入靶细胞基因组并稳定持久地表达所带的外源基因。病毒基因组以转座的方式整合,其基因组不会发生重排,因此所携带的外源基因也不会改变。而另一类整合载体——腺相关病毒,以同源重组的方式整合,整合过程中病毒基因组发生重排,可能会影响到外源基因的结构与功能。这种特性说明逆转录病毒有可能是一种天然的转导因子。同时根据这种特性,我们可以在正常细胞中进行操作,将它改建为有用的动物基因的转移载体。
2、逆转录病毒的寄主范围相当广泛,包括无脊椎动物和脊椎动物。其中有的还能够在人体细胞中生长。当两种不同的逆转录病毒在同一级主细胞中生长时,就会出现一种DNA被另一种外壳蛋白质包装成假型病毒的奇特现象。由于病毒的寄主范围实质上是由其蛋白质外壳决定的,因此使用这种假型病毒便有可能将某种病毒基因组导入正常无法感染的细胞,从而进一步扩大寄主范围。
3、逆转录病毒具有强启动子,克隆此类载体上的外源基因有可能得到有效地表达。有些逆转录病毒,例如鼠乳腺肿瘤病毒,其启动子的活性功能的开启或关闭可以通过实验手段予以控制。因为这种病毒基因的转录是受糖皮质激素诱导的。
4、逆转录酶不但感染效率高,而且通常还不会招致寄主细胞的死亡,被它感染的或转化的动物细胞能够持续许多世代,保持正常生长和形成感染性病毒颗粒的能力。因此,有可能利用逆转录病毒作载体,改变动物细胞的基因型,并可遗传到子代细胞。
5、它可以有效的整合入靶细胞基因组并稳定持久地表达所带的外源基因。病毒基因组以转座的方式整合,其基因组不会发生重排,因此所携带的外源基因也不会改变。而另一类整合载体——腺相关病毒,以同源重组的方式整合,整合过程中病毒基因组发生重排,可能会影响到外源基因的结构与功能。
逆转录病毒载体的优点
1、逆转录病毒结构基因gagenvpol的缺失不影响其他部分的活性;
2、包装好的假病毒颗粒易于分离制备;
3、逆转录病毒携带的遗传物质高效地进入靶细胞;
4、前病毒通过LTR高效整合至靶细胞基因组中,有利于外源基因在靶细胞中的永久表达。
逆转录病毒载体的缺点
1、随机整合,有插入突变、激活癌基因的潜在危险;
2、逆转录病毒载体的容量较小,只能容纳7 kb以下的外源基因。

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