测序类服务：外显子组测序技术服务

服务名称 ：测序类服务：外显子组测序技术服务

提供商 ：嘉美实验

实验技术简介：外显子测序是指利用序列捕获技术将全基因组外显子区域DNA捕捉并富集后进行高通量测序的基因组分析方法。是一种选择基因组的 编码序列 的高效策略，外显子测序相对于基因组重测序成本较低，对研究已知基因的 SNP 、Indel等具有较大的优势。

全外显子组（ Exome）是指基因组中全部外显子区域的总和，人类的外显子组约占基因组的1%~2%，包含了蛋白质合成的重要信息，是基因行使功能最直接的体现。绝大 部分疾病或性状相关的变异位于外显子区域，与全基因组重测序相比，全外显子组测序仅针对外显子区域内部和边界区域的 DNA进行测序，覆盖度更深，数据准确性更高，可更加经济、高效地发现与疾病或表型相关的个体遗传变异及罕见突变。人全外显子组测序技术已逐步应用到单基 因致病基因和复杂疾病易感基因研究中。

实验操作流程：

1、外显子捕获
采用以上三种捕获产品中的任何一种或者多种进行捕获实验。
2、高通量测序样品制备
样品扩增：Bridge PCR（Illumina平台）

3、上机测序
Illumina系统应用了末端可逆终止测序原理，采用特殊设计的荧光标记的dNTP。 这些核苷酸3'羟基末端带有可化学切割的部分，它只容许每个循环掺入单个碱基。反应结束后激光扫描反应板表面，读取测序信号。之后，将这些基团化学切割， 恢复3'端-OH，继续聚合第二个核苷酸，如此循环下去。

4、生物信息学分析
外显子测序后获得原始数据（raw reads），经过过滤去污染、比对参考基因组，获得比对到基因组上的Unique mapped reads。对数据进行标准的信息分析流程，包括对SNP、InDel等进行检测、注释和统计分析。同时对数据进行质控检测，包括测序深度、覆盖度均一性 等分析。

实验注意事项：

客户提供：

1、样品量：细胞样品请提供至少5×10⁶个细胞，组织样品请提供至少100mg的组织块或切片。DNA样品请提供2μg以上的基因组DNA。
2、样品质量：DNA无明显降解，OD260/280值在1.7～1.9之间，浓度≥ 50ng/μl。
3、样品保存：细胞样品或新鲜组织块（切成～50mg的小块）用液氮速冻后，-80℃保存。DNA样品可溶于的超纯水或TE（PH8.0）中，-20℃短期保存或者-80℃长期保存。样品保存期间避免反复冻融。
4、样品运输：细胞或组织样品置于1.5 ml管中，封口膜封好，干冰运输。DNA样本放离心管或者PCR板中，密封后，冰袋运输。

5、目的基因或转录因子的相关背景资料。

交付标准：

完整项目报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）

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