感受态制备试剂盒-200T

价格： ￥150

品牌：万类生物

货号：WLA039a

产品详情

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保存条件： 4℃

保质期：一年

规格：200T

万类生物试剂促销：试剂盒8折优惠，感受态制备试剂盒-200T 原价150元，现价120元。

产品名称：感受态制备试剂盒（试用装5T）

产品概述：大肠杆菌经过处理后可以摄取外源DNA（Plasmid DNA、Phage DNA等），处于这种状态的细胞称为感受态细胞（Competent Cell）。在基因工程试验中，经常要使用各种感受态细胞进行DNA的转化操作。

使用本试剂盒制备的感受态细胞可以满足大多数实验的需要，并且适用于几乎所有常用的大肠杆菌，例如：E.coli DH5α、JM109、CJ236、HB101、MV1184、BMH71-18mutS等，转化效率均可以达到1×10⁶cfu/μg pUC19以上（转化效率根据大肠杆菌细胞系及转化用DNA不同稍有差异）。使用本试剂盒制备的感受态细胞可以在-70℃保存一年。

注意事项:
1. 感受态制备试剂A和感受态制备试剂B要提前预冷。
2. 培养感受态细胞制备用菌体时，OD₆₀₀值的测定应随时进行，以使OD₆₀₀ 值控制在0.35-0.5之间。如OD₆₀₀值超出此范围，可能降低感受态细胞的转化效率。
3. 用于感受态细胞制备的菌体培养停止后要立即处理，不要将培养液过长时间室温放置，在冰中放置时也不要时间过长。
4. 感受态细胞的制备操作过程中，离心后弃上清时要尽量弃尽，否则会降低感受态细胞的转化效率。
5. 使用感受态制备试剂A 和感受态制备试剂B悬浮沉淀时，要用手指轻轻弹动Microtube管壁，禁止剧烈振荡操作。
6. 感受态分装后立即放入-70℃冰箱。

操作流程：

1. 取-70℃冰冻菌种，用划线法接种细菌于培养皿，做好标记，于37℃培养过夜。

2. 第二天，从平板上挑取单个菌落，接种至含有3mlLB培养液的试管中，37℃，175rpm振荡培养过夜。次日取菌液1ml接种至含有100mlLB培养基的500ml烧瓶中，37℃剧烈震荡培养约2.5h左右（200r/min）。

3. 当菌落OD₆₀₀值达到0.3-0.5时，将烧瓶取出放置冰上10-15min。在无菌条件下把菌液倒入50ml离心管中。4℃，4000rpm离心5min。

4. 弃上清，将离心管倒置于干滤纸上1min，吸干残留的培养液。加10ml 预冷的感受态制备试剂A到离心管中，轻轻吹打，悬浮菌体，冰浴30min。

5. 4℃，4000rpm离心5min，弃上清，将离心管倒置于干滤纸上1min，吸干残留的培养液。加4ml预冷的感受态制备试剂B，重悬浮菌体。每管0.2ml分装，至4℃保存备用，24-48h内使用效果较好。如果暂时不用，可再保存于-70℃的低温冰箱中。