产品详情
文献和实验
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保存条件 ：20℃避光储存
保质期 ：有效期1年
英文名 ：Hieff qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox Plus)
库存 ：大量
供应商 ：翌圣生物科技(上海)股份有限公司
CAS号 ：点击查看
规格 ：5ml
产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） | 回报价（元） |
| HieffTM qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox) | 11201ES03 | 1ml | -20℃避光 | 180.00 | 180.00 |
| 11201ES08 | 5×1ml | -20℃避光 | 740.00 | 498.00 | |
| 11201ES60 | 20×5ml | -20℃避光 | 12877.00 | 5980.00 |
HieffTM qPCR SYBR® Green Master Mix(No Rox)是2×实时定量PCR扩增的预混合溶液。Mix中含有热启动HieffTM DNA Polymerase、SYBR® Green I、dNTPs、Mg2+。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时荧光定量PCR，大大简化操作过程，降低污染几率。
本品采用的DNA聚合酶配体可以随温度变化实时调节DNA聚合酶活性。配方添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子，使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。
适用机型
Bio-Rad: CFX96TM, CFX384TM, iCycler iQTM, iQTM5, MyiQTM, MiniOpticonTM, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4TM;
Eppendorf: Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000;
Roche Applied Science: LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler®; Illumina: Eco qPCR.
反应体系（推荐冰上配制）
| 组分 | 体积（μl） | 体积（μl） | 终浓度 |
| HieffTM qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox) | 25 | 10 | 1× |
| Forward Primer (10μM) | 1 | 0.4 | 0.2μM |
| Reverse Primer (10μM) | 1 | 0.4 | 0.2μM |
| 模板DNA | X | X | - |
| 无菌超纯水 | to 50 | to 20 | - |
a) 引物浓度：通常引物终浓度为0.2μM，也可以根据情况在0.1-1.0μM之间进行调整。
b) 模板浓度：如模板类型为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。
c) 模板稀释：cDNA原液建议5-10倍稀释，最佳模板加入量以扩增得到的CT值在20-30个循环为好。
d) 反应体系：推荐使用20μl或50μl，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
扩增程序 （本产品可适用三步法和两步法程序）
三步法程序
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 5min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 10sec | 40 |
| 退火 | 55-60℃ | 20sec | |
| 延伸 | 72℃ | 20sec | |
| 熔解曲线 | 95℃ | 15sec | 1 |
| 60℃ | 60sec | ||
| 95℃ | 1 |
两步法程序
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 5min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 10sec | 40 |
| 退火、延伸 | 60℃ | 30sec | |
| 熔解曲线 | 95℃ | 15sec | 1 |
| 60℃ | 60sec | ||
| 95℃ | 15sec
|
【注】：
a) 预变性时间：根据不同模板和引物的具体情况可适当缩短至2min。
b) 退火温度和时间：请根据引物和目的基因的长度进行调整。
c) 荧光信号采集：请参考仪器设置。
d) 熔解曲线：通常情况下可以使用仪器默认程序。
结果分析
定量实验至少需要三个生物学重复。反应结束后需要确认扩增曲线及熔解曲线。
1) 扩增曲线：标准扩增曲线为S型。
- 值落在20-30之间时，定量分析最准确；
- 值小于10，需要将稀释模板后，重新进行实验；
- 值介于30-35之间时，需要提高模板浓度，或者增大反应体系的体积，以提高扩增效率，保证结果分析的准确性；
- Ct值大于35时，检测结果无法定量分析基因的表达量，但可用于定性分析。
- 熔解曲线单峰，表明反应特异性好可以进行定量结果分析；若熔解曲线出现双峰或者多峰，则不能进行定量分析。
- 熔解曲线出现双峰，需要通过DNA琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。
- 如果是引物二聚体，建议降低引物浓度，或者重新设计扩增效率高的引物。
- 如果是非特异性扩增，请提高退火温度，或者重新设计更高特异性的引物。
引物设计指南
1. 推荐引物长度25bp左右。扩增产物长度150bp为佳，可以在100bp-300bp内选择。
2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。引物Tm值60℃-65℃为佳。
3. 引物碱基分布要均匀，避免出现连续的4个相同碱基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。
4. 引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。
5. 引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物3’端有2个碱基以上的非特异性互补。
6. 设计完成的引物需要进行扩增效率的检测，只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。
注意事项
1. 推荐使用本公司cDNA合成试剂盒（货号：11104），以有效去除RNA样品中残留的基因组。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
运输与保存方式
冰袋运输。-20℃避光储存，有效期1年。
本品避免反复冻融。产品中含有荧光染料SYBR® Green I，保存或配制反应体系时需避免强光照射。
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| 产品名称 |
货号 |
规格 |
| 11119ES60 |
100 T |
|
| Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) |
11121ES60 |
100 T |
| Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus) HOT |
11123ES60 |
100 T |
| 11201ES08 |
5 ml |
|
| 11202ES08 |
5 ml |
|
| 11203ES08 |
5 ml |
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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入驻年限：17年
