基因敲入鼠

服务名称 ：基因敲入鼠

提供商 ：北京唯尚立德生物科技有限公司

条件性敲除小鼠、大鼠的构建服务
原理：
条件性基因敲除主要是通过Cre／10xP或者Ftp／FRT重组系统来实现的。这两个系统都是位点特异性重组酶系统，已发展成为在体内、外进行遗传操作的有力工具。这两个系统的应用，可以使靶基因的表达或缺失发生在试验动物发育的某一阶段或某一特定的组织器官。此外，若与控制Cre或Flp表达的其他诱导系统相结合，还可以对某一基因同时实现时空两方面的调控。
Cre-LoxP系统是源于P1噬菌体的一个DNA重组体系,由Cre酶和相应的LoxP位点组成,它能导致重组发生在特定的DNA序列处(LoxP位点),该系统可以将外源基因定点整合到染色体上或将特定DNA片段删除。
基于Cre-LoxP的基因打靶要分两步来进行。首先要在胚胎干细胞的基因组中引入LoxP序列，这一步可以通过打靶载体的设计和对同源重组子的筛选来实现。下一步通过Cre介导的重组来实现靶基因的遗传修饰或改变。Cre-LoxP系统既可以在细胞水平上用Cre重组酶表达质粒转染中靶细胞，通过识别LoxP位点将抗性标记基因切除，又可以在个体水平上将重组杂合子小鼠与Cre转基因小鼠杂交，筛选子代小鼠就可得到删除外源标记基因的条件性敲除小鼠。或者将Cre基因置于可诱导的启动子控制下，通过诱导表达Cre重组酶而将LoxP位点之间的基因切除（诱导性基因敲除），实现特定基因在特定时间或者组织中的失活。

敲入loxP小鼠的构建方案：

（一）ES法：

步骤	内容	周期
CAS9/gRNA的合成和同源模板（donor）构建	合成CAS9/gRNA，检测CAS9/gRNA活性，构建同源模板质粒。	2个月
mES细胞的筛选	转染mES细胞，筛选抗性克隆，鉴定mES克隆	4-6个月
mES细胞的囊胚注射与嵌合体小鼠的获得	囊胚注射ES细胞，构建嵌合体小鼠。可能会进行几轮的囊胚注射。	2-4个月
杂合子小鼠的交配和获得	嵌合体小鼠与野生型小鼠交配，获得杂合子小鼠。	4-5个月
总计		12-15个月

（二）CAS9直接注射受精卵法：

步骤	内容	周期
CAS9/gRNA的合成和同源模板（donor）构建	合成CAS9/gRNA，检测CAS9/gRNA活性，构建同源模板质粒。	2个月
得到Founder	CAS9/gRNA体外转录成mRNA和donor质粒共同显微注射受精卵，胚胎移植到代孕母鼠子宫，3周后出生，2周龄基因型鉴定。	2-3个月
得到F1代杂合子	2个月后性成熟，Founder和野生型小鼠交配，3周后出生，2周龄基因型鉴定，获得稳定传代的基因突变杂合子F1代。	3-4个月
总计		8个月

客户提供：

1、目标基因名字及序列
2、小动物的物种及品系
我们提供：
1、检测通过的小动物
2、动物清洁级报告
3、完整技术服务报告
通过严格检测的小动物