产品详情
文献和实验
相关推荐
保存条件 ：-20℃及避光
规格 ：20T
万类生物试剂促销：试剂盒8折优惠，一步法Tunel细胞凋亡检测试剂盒（显色法）-20T 原价1775元，现价1420元。产品名称：一步法Tunel细胞凋亡检测试剂盒（显色法）
产品概述：
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提 DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase，TdT）的催化下加上绿色荧光探针FITC标记的dUTP，之后经过POD转换试剂将信号转化成显色反应，方便结果的分析与保存。
Tunel细胞凋亡检测试剂盒不依赖生物素系统进行末端标记，避免了内源性生物素产生的高背景等问题。
包装信息：
该产品被引用文献（仅展示部分）：
1、Wang L; Xu W Y; Tang Y W, et al., Nitrative inactivation of thioredoxin-1 loses its protective effect in bleomycin-induced pulmonary fibrosis. Int Immunopharmacol 2022, 112, 109208.
PubMed: 36087509
2、Wang Y; Song M; Wang Q, et al., PINK1/Parkin-mediated mitophagy is activated to protect against AFB1-induced kidney damage in mice. Chem Biol Interact 2022, 358, 109884.
PubMed: 35304092
3、Sun C; Zhang A D; Chen H H, et al., Magnet-targeted delivery of bone marrow-derived mesenchymal stem cells improves therapeutic efficacy following hypoxic-ischemic brain injury. Neural Regen Res 2021, 16 (11), 2324-2329.
PubMed: 33818519
4、Wang D; Wei X; Chen X, et al., GRIM-19 inhibits proliferation and induces apoptosis in a p53-dependent manner in colorectal cancer cells through the SIRT7/PCAF/MDM2 axis. Exp Cell Res 2021, 407 (1), 112799.
PubMed: 34461110
5、Liu M; Zheng B; Liu P, et al., Exploration of the hepatoprotective effect and mechanism of magnesium isoglycyrrhizinate in mice with arsenic trioxideinduced acute liver injury. Mol Med Rep 2021, 23 (6).
PubMed: 33846815
操作流程：
1. A. 对于贴壁细胞：（最好用细胞爬片）
a. 接种于24/48/96孔板的细胞用PBS漂洗5min。
b. 预冷的4% Polyformaldehyde于4℃固定细胞30-60min。
c. PBS漂洗细胞3次，每次5min。
d. 加入含0.1%-0.2% Triton X-100 的 PBS（现用现配），冰浴2-5min。
e. 转至步骤2
1. B. 对于悬浮细胞：
a. 收集0.5-2×106个细胞，PBS漂洗一次 , 1000rpm 离心5min。
b. 预冷的4% Polyformaldehyde于4℃固定细胞30-60min。
c. PBS漂洗一次, 1000rpm 离心5min。
c. PBS漂洗一次, 1000rpm 离心5min。
d. 加入含0.1%-0.2% Triton X-100的PBS（现用现配），冰浴2-5min。
e. 转至步骤2
1. C. 对于石蜡切片：
a. 脱蜡，组织切片置于60℃恒温箱，烤片30-60min，浸入装有新鲜二甲苯的染色缸，室温放置15min。浸入另一个装有新鲜二甲苯的染色缸，重复一次。
b. 洗涤，组织切片浸入100%乙醇染色缸，室温放置10min。浸入另一个100%乙醇染色缸，重复一次。
c. 水化，组织切片浸入梯度浓度乙醇溶液（90%，80%，70%，50%），室温下每步放置3min。
d. 组织切片浸入PBS，室温放置5min。
e. 组织切片用柠檬酸缓冲液（PH=6.2）进行中火修复5min。（对于有些组织可以用1xProteinase K进行通透，即每个组织滴加50μl用PBS稀释的1×Proteinase K，室温静置15-30min，具体通透时间因组织而异，需要自行摸索）
f. 组织切片浸入PBS，室温放置5min，重复漂洗3次，如果用Proteinase K，通透则必须彻底去除残留Proteinase K 否则影响后续实验结果。
g. 转至步骤2
1. D. 对于冰冻切片 :
a. 预冷的4% Polyformaldehyde于4℃固定切片30-60min。
b. 组织切片浸入PBS，室温放置5min，重复漂洗2次。
c. 组织切片用柠檬酸缓冲液（PH=6.2）进行中火修复5min。
d. 组织切片浸入PBS，室温放置5min，重复漂洗3次，如果用Proteinase K通透则必须彻底去除残留Proteinase K，否则影响后续实验结果。
e. 转至步骤2。
2. 每个组织或细胞样本滴加50μl 3%H2O2 ，室温避光静置10min。
3. 组织切片或细胞浸入PBS 室温避光放置5min 重复漂洗2次。
3. 组织切片或细胞浸入PBS 室温避光放置5min 重复漂洗2次。
4. 阳性对照（选做）: 阳性对照的组织滴加50μl阳性对照缓冲液（24孔板每孔大概需要100-150μl）室温静置10min，浸入PBS，室温放置5min，重复漂洗3次。
注：为避免交叉污染，阳性对照组请用单独的染色缸漂洗！
5. 每个组织滴加50μl Tunel反应缓冲液（24孔板每孔大概需要100-150μl）， 37℃，避光孵育60-90min。
6. 阴性对照（选做）：用于进行阴性对照的组织或细胞滴加不含10×Enzyme Reagent 的Tunel反应缓冲液（45μl 1×Labeling Substrate与5μl去离子水混合），37℃，避光孵育60-90min。
7. 组织切片或细胞浸入PBS，室温放置5min，重复漂洗3次。
8. 每个组织滴加50μl POD转换缓冲液（24孔板每孔大概需要100-150μl），37℃，孵育30min。
9. 组织切片或细胞浸入PBS , 室温放置5min，重复漂洗3次。
10. 每个组织或细胞样本滴加50μl DAB显色剂（24孔板每孔大概需要100-150μl）， 室温孵育2-5min，根据实际显色情况自行摸索显色时间。
11. 复染细胞核：用苏木素复染细胞核（组织染色1min，细胞染色数秒）。
12. A. 对于贴壁细胞或细胞涂片。
蒸馏水返蓝后用50%甘油封片，随即进行显微镜观察。
12. B. 对于切片：
用1%盐酸酒精分化数秒，自来水返蓝。之后进行以下步骤：
a. 脱水，组织切片浸入梯度浓度乙醇溶液（50%，70%，80%，90%），室温下每步放置3min。
b. 洗涤，组织切片浸入100%乙醇染色缸，室温放置10min。浸入另一个100%乙醇染色缸，重复一次。
c. 透明，组织切片浸入装有新鲜二甲苯的染色缸，室温放置15min。浸入另一个装有新鲜二甲苯的染色缸，重复一次。
d. 中性树胶封片，通风橱内晾干，置于显微镜下观察。
产品图片：
沈阳万类生物科技有限公司
品牌商实名认证
金牌会员
入驻年限：15年
