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文献和实验
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保存条件 :-4
保质期 :1年
库存 :100T
供应商 :洛阳惠尔
概述本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统,从样品中分离纯化高质量核酸,特殊包被的磁珠,在一定条件下对目的核酸具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的核酸,能够达到快速分离纯化核酸的目的。整个过程不涉及有毒试剂,安全、便捷、提取的核酸纯度高。使用本试剂盒纯化的核酸可以应用到各类下游分子生物学实验。
Production.no | 名称 | 规格 | 储存条件 | 保质期 |
HRBD-0060 | 磁珠法血清游离DNA提取试剂盒 | 100T | 4℃ | 180天 |
从孕妇以及癌症患者等血清中提取游离DNA,或从血清中分离纯化高质量病毒DNA。用于产前检测,癌症患者的早期诊断等。适用于核酸自动化提取平台。
使用本试剂盒纯化的核酸可适用于各种常规操作,包括PCR、荧光定量PCR等各种下游实验。
试剂盒包装及组成
试剂盒组成 | 数量 |
Buffer A | 30 ml×1瓶 |
Buffer B | 20mg×1瓶 初次使用加入加入1ml洗脱液溶解 |
磁珠 | 2 ml×1瓶 |
洗涤液Ⅰ | 80 ml×1瓶 |
洗涤液Ⅱ | 80 ml×1瓶 |
洗脱液 | 11ml×1瓶 |
使用说明书 | 1份 |
1. Buffer B 4℃保存,可能会析出白色粉末状沉淀,使用前混合均匀,不影响使用效果。
2.磁珠用前一定要充分混匀。
3.如果血清量少于200µl,可以加生理盐水补至200µl。
操作步骤
1.裂解
a. 对于易裂解样本,取200µl血清到1.5mlEP管中,加入200µl Buffer A、10µl Buffer B,混合均匀(可用漩涡振荡器,1200~1800rpm)。然后把EP管置于恒温水箱中80℃温育10min,每隔3~5min,混匀一次。
b. 对于难裂解样本,取200µl血清到1.5mlEP管中,加入300µl Buffer A、10µl Buffer B,混合均匀(可用漩涡振荡器,1200~1800rpm)。然后把EP管置于恒温水箱中80℃温育10min,每隔3~5min,混匀一次。
2.结合
a. 对于易裂解样本,将EP管从温浴设备中取出,加入振荡混匀的磁珠20µl,加入异丙醇100 µl (自备);
b. 对于难裂解样本,将EP管从温浴设备中取出,加入振荡混匀的磁珠20µl,加入异丙醇150 µl (自备);
室温下颠倒混匀,结合5min。将EP管置于磁力架上进行磁分离,吸弃废液,(吸净管盖及管底残液)。
3.洗涤
⑴加入800µl洗涤液Ⅰ,点振5~10次,然后磁分离,吸净管盖及管底的残液;
⑵加入800µl洗涤液Ⅱ,点振5~10次(若磁珠有结块现象,加大震荡力度和洗涤时间,尽量使磁珠分散),然后磁分离,吸净管盖及管底的残液;
⑶将EP管置于磁力架上,晾干若干分钟,至没有乙醇味道,一般为5~10min,根据室内温度和湿度可适当延长或缩短晾干时间。
4.洗脱
加入100µl洗脱液,缓慢抽吸混匀,65℃温浴10min。每隔2~3min轻摇EP管几下混匀。然后磁分离,小心吸取上清液至新的EP管中,进行下游实验。
常见问题及参考意见
常见问题 | 可能的原因 | 建议 |
得率低 | 血清游离及病毒样本本身含有核酸量极少 | 可适当减少洗脱液体积,或增加样本取样量,Buffer A、Buffer B、磁珠及异丙醇用量可等比例增加,其他试剂用量不变。 |
裂解不充分 | 对于部分血清浓稠或病毒难裂解样本,可适当延长裂解时间,但不要超过20min。 | |
提取后没有及时测定 | 提取后及时测定或进行下游实验,如果不能及时完成,可将提取核酸-20℃保存。 | |
样品保存不当 | 不能及时测定或进行下游实验的提取样本,要-20℃保存,并且避免反复冻融。 | |
磁珠用量过量 | 磁珠法核酸提取并不是磁珠用量越多越好,磁珠用量过量反而会使得率降低,建议遵循试剂盒说明书磁珠用法及用量,如有疑问,可与公司技术人员沟通。 | |
异丙醇用量不足 | 对于一些特殊样本,可以适当增加异丙醇用量以提高得率。 | |
洗脱液有颜色 | 洗涤过程不充分 | 如果结合后磁珠呈团状、丝状或颗粒状,要增加点震力度及次数。 |
裂解过程不充分 | 如样本中含有大量多糖及酚类物质且没有裂解充分,可能使洗脱液颜色加深,可适当延长裂解时间,但不要超过20min。 | |
提取产物荧光定量PCR峰值过低 | 晾干步骤晾干不充分,洗脱液中含有乙醇量超标,会影响PCR扩增效率 | 适当延长晾干时间。判断乙醇是否完全晾干可以是否有乙醇味道为标准,或将EP管从磁力架上取下,磁珠不会很快下滑至管底即为乙醇已晾干。 |
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